草鱼（Ctenopharyngodon idella）成纤维细胞系的建立及其在阐明病原体感染致病机制中的应用

《Archives of Virology》：Establishment of grass carp (Ctenopharyngodon idella) fibroblast cell line and its application in elucidating pathogenic mechanisms of pathogen infection

从鲤鱼皮肤建立稳定纤维母细胞系CIEF，验证其物种来源及细胞特性，测试病原体敏感性并揭示细胞损伤机制和免疫应答激活。

　　

摘要

我们成功建立并鉴定了一种源自草鱼（Ctenopharyngodon idella）表皮组织的成纤维细胞系，将其命名为Ctenopharyngodon idella表皮成纤维细胞（CIEF）。该细胞系在添加了20%胎牛血清的M199培养基中，在标准培养条件（28°C，5% CO₂）下维持生长，表现出典型的成纤维细胞形态。CIEF细胞经过38次连续传代后仍能保持稳定的增殖能力，并且在冷冻保存后仍具有活力。通过18S核糖体RNA测序确认了该细胞系的草鱼来源。细胞遗传学分析显示其染色体数为48条，与草鱼的核型一致。双重免疫荧光实验表明该细胞同时表达了成纤维细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和成纤维细胞特异性蛋白1（FSP1），从而验证了其细胞身份。该细胞系对主要鱼类病原体具有敏感性，在感染Aeromonas hydrophila、Aeromonas veronii和草鱼呼肠孤病毒（GCRV）后表现出明显的细胞病变效应（CPE）。透射电子显微镜下的超微结构分析显示，病原体诱导了细胞结构的改变，包括凋亡小体的增加和吞噬泡的形成，同时细胞器也受到显著损伤，尤其是内质网和线粒体结构。定量实时PCR分析表明感染后抗菌免疫反应被激活，并观察到线粒体膜电位去极化。这一体外模型为研究鲤科鱼类中宿主-病原体相互作用、病原体致病机制以及细胞对水生病原体的反应提供了宝贵的平台。