lncRNA DLGAP1-AS2 调节 TGF-β/Smad 信号通路，从而调控肾细胞癌中的上皮-间质转化过程

《Biochemical Genetics》：lncRNA DLGAP1-AS2 Modulates the TGF-β/Smad Signaling Pathway to Regulate Epithelial-Mesenchymal Transition in Renal Cell Carcinoma

肾细胞癌中lncRNA DLGAP1-AS2通过调控TGF-β/Smad信号通路抑制上皮-间质转化，降低细胞增殖、迁移和侵袭能力。

　　

摘要

肾细胞癌（RCC）是泌尿系统常见的恶性肿瘤，但长链非编码RNA（lncRNA）DLGAP1-AS2在肾细胞癌上皮-间质转化（EMT）中的作用仍不明确。本研究将shRNA转染到RCC细胞中以降低lncRNA DLGAP1-AS2的表达。通过CCK-8、流式细胞术、Transwell实验和划痕实验分别评估了lncRNA DLGAP1-AS2敲低对RCC细胞增殖、细胞周期、侵袭性和迁移能力的影响。Western blotting用于检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）、EGFR、Vimentin和α-SMA的蛋白质表达，而免疫荧光则用于观察E-钙黏蛋白的表达情况。RNA pull-down实验证实了lncRNA DLGAP1-AS2与转化生长因子-β（TGF-β）的相互作用，通过核质分离和qRT-PCR分析了其亚细胞定位。RCC细胞被转染lncRNA DLGAP1-AS2 shRNA，或同时使用TGF-β抑制剂进行处理，随后通过qRT-PCR和Western blotting检测Snail、Slug、E-钙黏蛋白、EGFR、Vimentin、α-SMA、TGF-β、TGF-βRI和p-Smad3的表达水平。lncRNA DLGAP1-AS2的敲低减少了细胞的增殖、迁移和侵袭性，并使G0/G1期缩短。与NC-shRNA组相比，lncRNA DLGAP1-AS2 shRNA组的EGFR、Vimentin和α-SMA表达水平显著降低，而E-钙黏蛋白表达水平升高。研究表明TGF-β是lncRNA DLGAP1-AS2的靶标，且lncRNA DLGAP1-AS2主要定位于细胞质中。TGF-β抑制剂的使用增强了lncRNA DLGAP1-AS2对RCC细胞EMT的抑制作用。此外，转染lncRNA DLGAP1-AS2 shRNA还能抑制TGF-β/Smad信号通路。这些发现表明，降低lncRNA DLGAP1-AS2的表达可能通过调节TGF-β/Smad信号通路来抑制EMT，从而有助于抑制RCC的发展。

图形摘要

肾细胞癌（RCC）是泌尿系统常见的恶性肿瘤，但长链非编码RNA（lncRNA）DLGAP1-AS2在肾细胞癌上皮-间质转化（EMT）中的作用仍不明确。本研究将shRNA转染到RCC细胞中以降低lncRNA DLGAP1-AS2的表达。通过CCK-8、流式细胞术、Transwell实验和划痕实验分别评估了lncRNA DLGAP1-AS2敲低对RCC细胞增殖、细胞周期、侵袭性和迁移能力的影响。Western blotting用于检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）、EGFR、Vimentin和α-SMA的蛋白质表达，而免疫荧光则用于观察E-钙黏蛋白的表达情况。RNA pull-down实验证实了lncRNA DLGAP1-AS2与转化生长因子-β（TGF-β）的相互作用，通过核质分离和qRT-PCR分析了其亚细胞定位。RCC细胞被转染lncRNA DLGAP1-AS2 shRNA，或同时使用TGF-β抑制剂进行处理，随后通过qRT-PCR和Western blotting检测Snail、Slug、E-钙黏蛋白、EGFR、Vimentin、α-SMA、TGF-β、TGF-βRI和p-Smad3的表达水平。lncRNA DLGAP1-AS2的敲低减少了细胞的增殖、迁移和侵袭性，并使G0/G1期缩短。与NC-shRNA组相比，lncRNA DLGAP1-AS2 shRNA组的EGFR、Vimentin和α-SMA表达水平显著降低，而E-钙黏蛋白表达水平升高。研究表明TGF-β是lncRNA DLGAP1-AS2的靶标，且lncRNA DLGAP1-AS2主要定位于细胞质中。TGF-β抑制剂的使用增强了lncRNA DLGAP1-AS2对RCC细胞EMT的抑制作用。此外，转染lncRNA DLGAP1-AS2 shRNA还能抑制TGF-β/Smad信号通路。这些发现表明，降低lncRNA DLGAP1-AS2的表达可能通过调节TGF-β/Smad信号通路来抑制EMT，从而有助于抑制RCC的发展。

图形摘要