LINC01184通过miR-193a-3p/DCAF7轴促进肝细胞癌的发展

《Archives of Biochemistry and Biophysics》：LINC01184 promotes hepatocellular carcinoma development via the miR-193a-3p/DCAF7 axis

LINC01184通过竞争性内源RNA机制调控miR-193a-3p/DCAF7轴促进肝癌恶性表型和肿瘤生长。

　　

王冰|邹迅|肖远初

中国湖北省荆州市434021，长江大学附属荆州医院肝胆胰脾外科

摘要

目的

肝细胞癌（HCC）主要发生在患有慢性肝病和肝硬化的患者中。长链非编码RNA（lncRNAs）作为基因表达的关键调节因子，在癌症生物学中起着重要作用。本研究旨在探讨LINC01184在调节HCC细胞恶性转化和异种移植肿瘤生长中的作用。

方法

使用RT-qPCR检测HCC细胞中LINC01184的表达水平。通过核质分离实验确定LINC01184的亚细胞定位。通过菌落形成和Transwell实验评估细胞增殖、侵袭和迁移能力。利用Western blotting定量上皮-间质转化（EMT）标志物的蛋白水平。利用萤光素酶报告基因和RNA免疫沉淀（RIP）实验研究LINC01184、miR-193a-3p和DCAF7之间的分子相互作用。体内实验通过建立异种移植小鼠模型来评估肿瘤发生情况。

结果

LINC01184在HCC细胞中显著上调。敲低LINC01184显著抑制了HCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力，并抑制了EMT过程。此外，LINC01184通过与miR-193a-3p结合，作为竞争性内源性RNA从而正向调节DCAF7的表达。进一步的研究表明，过表达DCAF7能有效逆转LINC01184对HCC细胞恶性转化的抑制作用。体内实验证实，DCAF7过表达可以恢复LINC01184敲低或miR-193a-3p过表达所引起的肿瘤生长抑制效应。

结论

LINC01184通过涉及miR-193a-3p和DCAF7的调控轴促进HCC的恶性表型和异种移植肿瘤的进展。

引言

肝细胞癌（HCC）是最常见的原发性肝癌类型，通常在慢性肝病的背景下发展[1, 2, 3]。由于早期诊断和准确诊断的挑战，只有大约20%的早期HCC患者适合接受手术切除、肝移植或局部消融等根治性治疗[3, 4]。尽管诊断技术和治疗策略有所进步，术后复发仍然导致HCC患者的总体五年生存率低于30%[5, 6]。因此，迫切需要识别更具体和可靠的生物标志物来改善HCC的预后评估和治疗效果。

非编码RNA（ncRNAs）是一类来自基因组的功能性RNA转录本，不编码蛋白质[7]。根据转录本长度，ncRNAs大致分为小非编码RNA和长链非编码RNA（lncRNAs）[8]。lncRNAs定义为长度超过200个核苷酸的转录本，在调节染色质重塑、转录活性和基因表达中起关键作用[9]。越来越多的证据表明，lncRNAs深度参与表观遗传调控、转录控制和多种人类疾病的发展，包括癌症[10, 11, 12]。在这些调控机制中，竞争性内源性RNA（ceRNA）假说解释了内源性RNA（包括lncRNAs）如何共享miRNA结合位点，从而竞争与miRNAs的结合，最终调节下游靶基因的表达。通过这种机制，ceRNAs影响各种肿瘤类型的侵袭、凋亡、迁移和增殖等关键细胞过程[13]。失调的lncRNAs通过ceRNA机制与HCC的进展密切相关。例如，lncRNA PWRN1通过与miR-362-3p相互作用并调节MIOX来发挥抗肿瘤作用[14]。LINC02362通过调节下游miR-18a-5p和FDX1触发铜死亡并抑制HCC细胞增殖[15]。SNHG14在HCC中表达升高，并通过与miR-206结合促进细胞侵袭、迁移和增殖，从而导致SOX9的上调[16]。先前的研究表明，LINC01184在HCC组织中高表达，并与不良临床结果相关[17]。然而，LINC01184在HCC中的作用尚未得到充分研究。值得注意的是，在结直肠癌中，LINC01184已被报道可以促进细胞增殖和侵袭同时抑制凋亡[18]。基于这些发现，我们假设LINC01184也可能在HCC中作为致癌基因，通过ceRNA介导的调控途径促进肿瘤进展。

本研究探讨了LINC01184在HCC肿瘤发生中的调控作用。我们的研究发现，miR-193a-3p是LINC01184的下游靶基因，而DACF7是miR-193a-3p的直接靶基因。先前的研究证实miR-193a-3p可以抑制HCC细胞增殖并诱导凋亡[19]。此外，Yi等人报告称DCAF7在HCC组织中表达显著升高[20]，尽管其在肿瘤进展中的功能作用尚未完全明确。这些结果共同提示了HCC中可能存在LINC01184/miR-193a-3p/DCAF7的调控轴，为肝癌发展的分子机制提供了新的见解，并为治疗干预提供了有希望的途径。

实验部分

细胞培养

人正常永生化肝细胞系（THLE-3）和HCC细胞系（SNU-449、MHCC-97H和Huh7）分别从美国类型培养收集中心（Manassas, VA）和Sunncell（武汉, 中国）购买。细胞在添加了10%胎牛血清（Oumarsi）的Dulbecco改良Eagle培养基（Oumarsi, 上海）中培养，并在37°C、5% CO₂的湿润培养箱中维持。

细胞转染

为了敲低LINC01184，使用了针对LINC01184的短发夹RNA（sh-LINC01184#1）

HCC细胞中LINC01184表达的上调

先前的研究报告称HCC组织中LINC01184表达升高，将其鉴定为具有显著预后价值的致癌lncRNA[17]。在本研究中，使用RT-qPCR检测了HCC细胞和正常人肝细胞（THLE-3）中的LINC01184水平。如图1A所示，三种HCC细胞中的LINC01184表达分别比THLE-3组增加了7.3倍、6.1倍和6.5倍。FISH和亚细胞分离分析显示LINC01184主要位于细胞质中

讨论

越来越多的证据表明lncRNAs参与HCC的肿瘤发生和转移[25, 26, 27, 28]。鉴于转移是影响HCC患者长期生存的主要因素[29]，阐明lncRNA驱动的分子机制在临床上非常紧迫且在生物学上具有重要意义。尽管已有报道指出LINC01184在HCC中异常表达并与不良临床结果相关[17]，但其功能作用和潜在机制仍需进一步研究

CRediT作者贡献声明

肖远初：监督、软件使用、资源提供、方法设计、实验实施。邹迅：监督、软件使用、资源提供、项目管理、方法设计。王冰：撰写 – 审稿与编辑、初稿撰写、数据可视化、验证、监督、软件使用、资源提供、项目管理、方法设计、实验实施、数据分析、概念构思

临床试验编号

不适用。

伦理批准

动物实验获得了Bestcell Model Biological Center的实验室动物福利与伦理委员会批准（编号：BSMS 2023-08-15A；日期：2023年8月8日）。

发表同意

不适用。

数据和材料的可用性

本研究生成或分析的所有数据均可向相应作者索取。

资金支持

未收到任何资金支持。

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。