唾液锌指蛋白510（ZFP510）的过表达作为口腔鳞状细胞癌的新型诊断生物标志物：一项病例对照研究

《BMJ Connections Oncology》：Overexpression of salivary Zinc Finger Protein 510 (ZFP510) as a novel diagnostic biomarker in oral squamous cell carcinoma: a case–control study

　　摘要
引言
口腔鳞状细胞癌（OSCC）在全球范围内与较高的发病率和死亡率相关，其预后很大程度上取决于早期发现。唾液是检测口腔癌的宝贵介质，因为它直接接触病变部位，采集方式无创，并能反映局部和系统的分子变化。锌指蛋白510（ZFP510）在其他恶性肿瘤的致瘤通路中起作用，但在唾液诊断中的研究尚不充分。

研究设计和方法
本病例对照研究包括了临床怀疑有口腔病变且随后被确认为OSCC的患者（n=30）和健康对照组（n=15）。在标准化条件下收集未经刺激的全唾液。使用ELISA方法测定ZFP510的浓度。进行了统计分析，并评估了接收者操作特征（ROC）分析以评估诊断性能。

结果
与健康对照组相比，OSCC患者的唾液ZFP510水平显著升高（p<0.05）。观察到ZFP510浓度与组织病理学分级之间存在强正相关性，分化较差的癌变表现出最高的ZFP510值。几个与人口统计学和习惯相关的变量与ZFP510水平显著相关。多变量分析确认ZFP510是OSCC的独立预测因素。ROC分析显示敏感性为87.3%，特异性为83.1%。

结论
唾液是检测口腔癌的宝贵介质。OSCC中ZFP510的显著上调及其与肿瘤去分化之间的明确关联，凸显了其作为早期诊断和疾病监测的无创生物标志物的潜力。需要进行更大规模的多中心验证研究，结合组织水平的相关性和多标志物诊断框架。

关于该主题已有了解
唾液已成为口腔肿瘤学中一种有价值的诊断介质，因为它无创、易于获取，并能反映局部肿瘤活动和系统变化。虽然已经研究了几种唾液生物标志物用于口腔鳞状细胞癌（OSCC），但很少有标志物与肿瘤分化有一致的相关性或显示出强的诊断准确性。

本研究新增内容
本研究确定锌指蛋白510（ZFP510）是OSCC中显著升高的唾液生物标志物，并证明了其表达与组织病理学肿瘤去分化之间的明确分级关联。观察到的诊断性能表明ZFP510提供了生物学上有意义的信息，补充了现有的生物标志物研究。

本研究可能对研究、实践或政策产生的影响
通过强调ZFP510作为OSCC存在和肿瘤侵袭性的有希望的无创指标，本研究支持将基于唾液的生物标志物检测整合到早期检测策略中。由于其易于采集，它特别适用于人群筛查、社区宣传计划和资源有限的环境，从而可能影响临床路径和公共卫生政策。

引言
口腔癌是一个重大的全球健康挑战，是全球第六大常见恶性肿瘤，每年约有377,000新病例和177,000例死亡。口腔鳞状细胞癌（OSCC）占这些病例的约90%，其特征是生物学行为具有侵袭性，尤其是晚期诊断时预后较差。尽管治疗方式有所进步，但5年生存率仍低至50%–60%，这主要是由于诊断延迟，大约60%–70%的病例在III期或IV期才被发现，此时治疗效果显著降低。OSCC的病因学表现出显著的地理差异，这与特定的行为、环境和遗传风险因素有关。传统风险因素包括烟草消费、过量饮酒及其协同作用。咀嚼槟榔在东南亚和南亚人群中尤为普遍，是另一个重要风险因素。HPV感染——特别是HPV-16和HPV-18血清型——已成为独立的风险因素，尤其是在没有传统风险暴露的年轻患者中。OSCC的发病率在地理上存在显著差异，南亚和东南亚、中欧和东欧部分地区以及某些太平洋岛国的发病率特别高。

当前OSCC的诊断方法主要依赖于传统的视觉和触觉检查，随后通过组织活检进行组织病理学确认。虽然这种方法仍是金标准，但它存在几个局限性，包括主观的临床检查、活检程序的侵入性、患者不适、潜在的采样错误以及获得明确结果的延迟。先进的成像技术如MRI、CT和正电子发射断层扫描提供了更好的可视化能力，但主要用于分期而非初始检测，对于早期病变的敏感性有限。传统的诊断方法往往无法检测到可见形态变化之前的早期分子变化，导致诊断延迟和预后不良。这些局限性凸显了开发非侵入性、客观和敏感的早期检测方法的重要性。将分子生物标志物整合到诊断算法中是一种有前景的方法，可能有助于更早的干预并改善生存结果。唾液因其无创采集方法和与口腔腔的直接接触而成为检测口腔癌的特别有希望的介质。它含有丰富的生物成分，包括来自局部和系统的蛋白质、核酸、代谢物和细胞元素。唾液与口腔病变的直接和长期接触促进了通过直接脱落、外泌体释放、渗出或主动分泌获得的肿瘤相关分子。唾液采集无创、无痛、经济且需要最少的技术技能，适合在资源有限的环境中进行广泛筛查。

最近在蛋白质组学、基因组学、转录组学和代谢组学方面的技术进步显著提高了唾液生物标志物检测的敏感性，使得能够在极低浓度下识别和量化分子。这些发展加速了具有潜在诊断价值的新型唾液生物标志物的发现和验证。锌指蛋白（ZFPs）是哺乳动物中最大的转录因子家族之一，其特征是锌指结构域，可介导与DNA、RNA或蛋白质的特定相互作用。这些进化保守的蛋白质调节多种细胞过程，包括基因表达、DNA识别和修复以及染色质重塑。特定ZFPs的失调与多种恶性肿瘤有关，涉及异常基因表达、基因组不稳定、细胞增殖改变和凋亡受损。ZFP510在癌症研究中受到越来越多的关注，因为它参与调控与细胞增殖、分化和凋亡相关的基因的转录。先前的研究记录了多种恶性肿瘤（包括乳腺癌、结直肠癌和肝细胞癌）中ZFP510的表达异常，其表达模式经常与疾病进展和预后相关。Ahmed等人的开创性工作显示，OSCC患者的唾液ZFP510水平显著高于健康对照组，特别是在疾病早期阶段具有较高的敏感性和特异性。他们的研究在唾液中识别出特定的ZFP510肽信号，这些信号在临床表现出现之前就已经与疾病存在相关，表明其潜在的应用包括初步检测和治疗后监测。尽管有这些初步的有希望的发现，但全面评估ZFP510作为OSCC检测的唾液生物标志物在不同患者群体、疾病阶段和组织病理学变异中的效果仍不完整。本研究旨在系统地调查组织病理学确认的OSCC患者与健康对照组之间的唾液ZFP510表达，特别关注其与疾病存在和组织病理学分级的关联。尽管临床分期在OSCC中很重要，但由于并非所有病例都提供了完整的TNM分期信息，因此未进行分期关联分析，并相应调整了研究目标。本研究采用了先进的蛋白质组学技术（如ELISA）来定量ZFP510肽片段，以提高敏感性和特异性。通过确立唾液ZFP510作为OSCC检测生物标志物的实用性，本研究旨在推动非侵入性诊断方法的发展，从而可能实现更早的干预并改善口腔癌患者的生存结果。

方法
研究设计和伦理考虑
这项前瞻性病例对照研究于2024年3月至2024年10月在口腔医学和放射科进行。有训练有素的工作人员负责回答参与者的问题，在详细解释研究目的、方法、可能的危害和预期益处后，所有参与者都以其首选语言提供了书面知情同意书。参与完全自愿，明确保证在任何时间退出都不会影响标准临床护理。使用唯一的识别代码进行系统匿名化，确保在整个研究过程中保护参与者隐私。

患者和公众参与
患者或公众没有参与该设计、实施、报告或传播。

样本量确定和研究人群
样本量计算使用了比较两个独立均值的定量变量公式：N=(Z1-α/2)2×s2÷E2，其中Z代表95%置信水平的Z分数（1.96），s表示来自初步观察的SD，E表示估计的误差范围。该计算得出至少需要45名参与者：30名组织病理学确认的OSCC患者（病例）和15名健康个体（对照组）。研究人群包括出现临床怀疑口腔病变需要活检以确诊的成年患者（≥18岁）。对照组从无口腔病变或无显著风险因素的陪同人员和志愿者中招募，他们在年龄、性别和社会经济地位上相匹配。纳入标准包括：（1）≥18岁的成年人；（2）病例：通过组织病理学检查确认为OSCC的临床怀疑口腔病变患者；（3）对照组：无可见口腔黏膜异常的健康个体；（4）愿意提供知情同意。

排除标准包括：（1）影响唾液成分的系统性疾病史（糖尿病、干燥综合征、自身免疫性疾病）；（2）既往或同时存在的恶性肿瘤；（3）近期（14天内）牙科手术；（4）正在接受放射治疗或化疗；（5）怀孕或哺乳；（6）使用已知影响唾液流量或成分的药物；（7）身体和精神上有障碍；（8）未确诊的患者。

患者评估
每位参与者都接受了全面的评估，包括详细的医疗、牙科和习惯史记录。习惯史评估记录了类型（吸烟、无烟烟草、酒精、咀嚼槟榔）、频率、持续时间和累积暴露量。外部检查评估面部对称性、皮肤变化、淋巴结肿大和颞下颌关节功能。内部检查记录了病变特征（位置、大小、形态、颜色、硬化）和一般牙科状况。临床怀疑有口腔病变的患者被转诊到专门的癌症机构或外科部门进行活检程序。组织病理学分析由各转诊中心的病理科进行，报告提供明确诊断，并对确认的OSCC病例进行WHO标准的分级（良好、中度或分化不良）。随后收集这些报告以与唾液生物标志物发现进行关联。

唾液样本采集和处理
未经刺激的全唾液采集在禁食一夜（≥8小时）后的8:00至10:00之间进行，以最小化日变化和饮食影响。参与者在采集前2小时内避免使用口腔卫生产品（牙膏、漱口水），并用10毫升蒸馏水漱口30秒以清除残留物。平衡5分钟后，受试者将唾液收集在口腔底部，丢弃最初的1毫升以消除潜在污染，然后被动滴入无菌聚丙烯管中直至收集到5毫升（最长15分钟）。采集管中含有蛋白酶抑制剂混合物（1:100稀释液）以防止蛋白质降解。

使用ELISA测定ZFP510
唾液ZFP510的定量评估使用了KBH4759-Human Zinc Finger Protein 510, ZNF510 GENLISA ELISA-96 Wells Kit。这种夹心ELISA系统使用预包被的96孔板，其中包含抗ZNF510捕获抗体、生物素化检测抗体、链霉亲和素-辣根过氧化物酶（HRP）酶结合物和四甲基联苯胺（TMB）底物进行比色检测。分析流程从4°C解冻样本开始，然后离心（3000×g，5分钟），并在0.1%牛血清白蛋白缓冲液中稀释（1:2）。标准品（7点系列稀释）和稀释样本（100微升）分别加入微孔板中，37°C下孵育120分钟，同时旋转300转/分钟。孵育后，孔板经过五次洗涤以去除未结合的物质。然后加入生物素化检测抗体（100微升），37°C下孵育60分钟，随后洗涤。接着加入链霉亲和素-HRP结合物（100微升），室温下孵育30分钟，然后洗涤并加入TMB底物（100微升），黑暗环境中孵育15分钟。反应用终止溶液（50微升）终止，使用每日校准的微孔板分光光度计在450纳米处测量吸光度。通过标准曲线的四参数逻辑回归分析确定ZFP510浓度，并根据总蛋白含量（ng ZFP510/mg总蛋白）进行标准化，以考虑唾液组成的个体差异。

质量控制措施
严格的质量控制措施确保了数据的可靠性。这些措施包括：（1）由训练有素的人员进行标准化样本采集；（2）视觉检查以排除污染样本；（3）使用Bradford测定法进行蛋白质浓度标准化；（4）每次测定包括三次重复测量，变异系数<10%；（5）每次测定包括内部质量控制；（6）标准曲线的R2>0.98以验证测定性能；（7）对10%的样本进行盲法重复测试以确保分析精度。

统计分析
统计分析使用JASP V.19.3软件进行。描述性统计分析了人口统计学和临床变量，连续数据根据Shapiro-Wilk检验的正态性评估结果，以均值±标准差（SD）或中位数（IQR）表示。分类变量则以频率和百分比的形式报告。口腔唾液中ZFP510表达的组间比较使用了独立t检验或Mann-Whitney U检验。组织病理学级别的差异通过方差分析（ANOVA）或Kruskal-Wallis检验进行评估，并对显著结果进行了适当的后续检验。分类变量之间的关联，包括风险因素和临床特征，使用了带Yates校正的χ2检验进行检验。在调整了潜在的混杂变量后，多元线性回归模型确定了ZFP510表达水平的独立预测因子。接收者操作特征（ROC）曲线分析用于评估诊断性能，计算灵敏度、特异性、阳性预测值和阴性预测值以及曲线下面积（AUC）。统计显著性标准设定为p<0.05，并使用了Bonferroni或Holm-Sidak方法进行多重比较调整。

本研究旨在评估唾液是否是早期检测口腔癌生物标志物的可靠样本，我们比较了口腔鳞状细胞癌（OSCC）患者和健康对照组唾液中ZFP510的表达情况，以评估其作为早期诊断唾液生物标志物的潜力。通过描述性统计和统计分析来评估两组之间的差异。研究结果与主要和次要研究目标保持一致。

**主要目标：OSCC中的ZFP510表达**

**对照组和疾病组中的唾液ZFP510表达**
结果表明，对照组和疾病组之间的唾液ZFP510水平存在显著差异（Mann-Whitney U检验，p=6.46 × 10??；独立t检验，t=?7.222，df=43，p<0.001），效应量较大（Cohen’s d=?2.284），这显示了统计和临床上的显著性（表1，图1）。

**表1** • 疾病组与对照组之间唾液ZFP510水平的比较分析
**图1** 患病组和对照组中唾液ZFP510浓度的箱形图（ pg/mL）

**ZFP510表达与组织病理学级别的关系**
随着组织病理学级别的提高，ZFP510表达逐渐增加（Kruskal-Wallis检验，H=25.505，p<0.001；Welch调整后的单因素ANOVA，F(2, 15.027)=30.208，p<0.001）（表2，图2）。

**表2** • 不同组织病理学级别中ZFP510浓度的描述性分析
**图2** 不同组织病理学级别中唾液ZFP510浓度的条形图，显示随着OSCC组织病理学级别的提高，唾液ZFP510浓度逐渐增加（ pg/mL）。

**使用Tukey’s HSD的后续分析显示，低分化与高分化鳞状细胞癌（SCC）之间存在显著差异（平均差异=?761.761?pg/mL，p<0.001），以及低分化与中等分化SCC之间的差异（平均差异=?537.989?pg/mL，p<0.001）。高分化与中等分化SCC之间的差异接近但不显著（平均差异=?223.772?pg/mL，p=0.081）（在线补充表S1）。Dunn的后续检验确认低分化SCC中的ZFP510水平显著高于高分化（p=0.001）和中等分化SCC（p=0.222）**。

**Spearman等级相关分析显示ZFP510表达与组织病理学级别之间存在强正相关（r=0.938，p<0.0001）（在线补充图S1），表明其作为疾病严重程度的生物标志物的潜力。**

**多元回归分析（R2=0.598）确定组织病理学级别是ZFP510浓度的唯一显著预测因子，这一关系独立于其他临床因素。**

**次要目标：与ZFP510表达相关的人口统计学和临床特征**

**研究参与者的 demographic 特征**
研究队列包括45名参与者：30名OSCC患者和15名健康对照组。疾病组中男性17名（56.7%）和女性13名（43.3%），对照组中男性7名（46.7%）和女性8名（53.3%）（在线补充表S2和图S2），性别与疾病状态之间无显著关联（χ2=0.402，p=0.526）。

**临床特征和风险因素**
咀嚼槟榔是最主要的风险因素（43.3%），其次是吸烟（20.0%），反映了地区的病因模式（在线补充表S3和图S3）。病变部位分布不均，颊黏膜（30%）和舌部（20%）最常受到影响（在线补充表S4和图S4）。组织病理学分级显示11例高分化（36.7%）、10例中等分化（33.3%）和9例低分化（30.0%）的OSCC病例（在线补充表S5和图S5）。

**人口统计学因素与ZFP510表达的关联**
相关性分析显示ZFP510水平与临床参数之间存在关联（在线补充表S6和图S6）。ZFP510与年龄呈中等正相关（Spearman’s r=0.595，p<0.0001；Pearson’s r=0.603，p<0.001），尽管年龄本身无法区分健康个体和OSCC患者。ZFP510水平与性别之间没有显著关联（r=?0.079，p=0.6065）。

**风险因素和ZFP510表达**
多元分析显示，在控制了组织病理学级别和年龄后，特定风险因素与ZFP510浓度之间没有显著关联，这表明ZFP510水平的升高主要由疾病过程而非致癌物暴露驱动（在线补充图S7）。

**不同解剖部位中的ZFP510表达**
跨解剖部位的ZFP510表达没有显著变化（ANOVA，p=0.218），而年龄（β=0.143，p=0.186）和性别（β=?0.058，p=0.572）的贡献不显著（在线补充表S8和图S8）。

**影响ZFP510表达的多种因素的多元分析**
多元回归分析（R2=0.598，调整后R2=0.574，F(3, 41)=20.34，p<0.0001）确定组织病理学级别是ZFP510浓度的唯一显著预测因子（β=0.712，p<0.0001），而年龄（β=0.143，p=0.186）和性别（β=?0.058，p=0.572）的贡献不显著（在线补充表S8和图S9）。

**不同人口亚组中ZFP510的诊断性能**
ROC分析显示，ZFP510在不同人口亚组中的诊断性能一致，所有类别的AUC值均超过0.95，证实了ZFP510作为独立于人口变量的稳健诊断工具的实用性（表3，图3）。

**表3** • 不同人口亚组中ZFP510的诊断性能
**图3** 不同人口亚组中ZFP510的ROC曲线。一致的高AUC值（>0.95）表明ZFP510的诊断性能不受性别或年龄的影响。

**我们的分析表明，组织病理学级别是ZFP510表达的主要决定因素，其在不同人口亚组中的诊断性能保持一致。这些发现表明，OSCC中的ZFP510表达主要由恶性肿瘤相关的生物学过程驱动，而非人口因素或风险行为，支持其作为临床上有价值的诊断和预后生物标志物的潜力。**

**讨论**
唾液是一种可获取、非侵入性的媒介，适用于口腔癌生物标志物的研究。本研究评估了OSCC患者和健康对照组唾液样本中ZFP510的表达情况，以评估其作为早期诊断生物标志物的潜力。我们的发现证实了ZFP510作为非侵入性诊断工具的有效性，表现为OSCC患者的唾液水平显著高于对照组（p<0.05），并且与组织病理学级别有很强的相关性（r=0.938，p=0.0001）。

**口腔癌中ZFP表达的生物学意义**
OSCC患者中ZFP510的显著升高与新兴证据一致，这些证据表明ZFPs参与了致癌过程。这些转录因子调控多种生物学过程，包括分化、发育和肿瘤进展。先前的研究记录了多种癌症类型中ZFP表达的异常，包括乳腺癌、前列腺癌和结直肠癌。口腔癌中ZFP510过表达的分子机制可能涉及多个途径。Ahmed等人18证明ZFPs与致癌信号通路相互作用，特别是在OSCC中失调的Wnt/β-连环蛋白通路。此外，Zhang等人22报告称ZFPs通过表观遗传修饰（包括DNA甲基化和组蛋白改变）促进癌症进展，这些在口腔癌发生中至关重要。

**ZFP510水平与组织病理学级别之间的相关性表明其参与了肿瘤分化和进展。不同组织病理学类别中的逐步增加（高分化：580.103?pg/mL；中等分化：853.875?pg/mL；低分化：1341.863?pg/mL）表明其在肿瘤去分化中可能起作用。这种模式与Chen等人的23发现一致，他们在食管鳞状细胞癌进展中也观察到了类似的趋势。**

**值得注意的是，Zhao等人24提出某些ZFPs在上皮到间质转化（EMT）过程中起分子开关作用，这是癌症侵袭和转移的关键机制。低分化肿瘤中显著的ZFP510水平升高可能反映了EMT活动的增加，解释了它们的侵袭性行为。**

**低分化肿瘤中ZFP510水平的较大标准差（SD=399.835）与高分化（SD=91.014）和中等分化（SD=66.932）肿瘤相比，表明晚期OSCC阶段分子异质性增加。这一发现与Kumar等人的25观察结果一致，他们发现晚期头颈部鳞状细胞癌中分子异质性增强，可能解释了治疗抵抗性和不良临床结果。**

**与已建立的口腔癌生物标志物的比较分析**
口腔癌的唾液诊断技术已显著发展，已识别和评估了许多生物标志物。将ZFP510的性能与已建立的生物标志物进行比较，可以了解其诊断价值。传统的OSCC分子标志物包括DNA改变（p53突变）、RNA标志物、蛋白质（IL-6、IL-8）和代谢物。Wang等人26报告唾液IL-6和IL-8的敏感性和特异性分别为86%和81%。相比之下，基于ZFP510的诊断模型具有100%的敏感性和特异性。同样，Yamashita等人27评估了一个mRNA生物标志物组合（DUSP1、H3F3A、IL1B、SAT1），其AUC为0.85，远低于我们的ZFP510模型的1.000。Chen等人28评估了口腔癌患者中的唾液EMT相关蛋白质，报告E-钙黏蛋白的AUC为0.88，vimentin的AUC为0.79。ZFP510的完美区分能力（AUC=1.000）表明其具有优于EMT相关标志物的诊断潜力。Zhang等人29评估了OSCC组织样本中的ZFPs，发现ZNF671和ZNF582的显著升高，其AUC分别为0.89和0.84。我们的唾液ZFP510标志物的优异性能可能归因于唾液采样的非侵入性，它比靶向组织活检能捕获更全面的分子谱型。Richardson和Kulkarni30表明唾液生物标志物可以反映系统的肿瘤反应，从而提高诊断敏感性。**

**我们的ZFP510模型实现了100%的完美分类准确性，这与使用多种生物标志物的机器学习方法一致。Ishikawa等人31使用三个唾液代谢物通过支持向量机算法达到最高92.3%的准确性，表明ZFP510作为一个独立标志物可以简化诊断程序并降低成本。**

**我们的全面分析提供了影响ZFP510表达的因素的见解。性别之间没有显著相关性（r=?0.079，p=0.6065），这与Martinez-Perez等人32的发现一致，即口腔癌患者中唾液蛋白表达与性别无关，增强了ZFP510的广泛诊断适用性。年龄与ZFP510浓度之间的中等正相关（Spearman’s r=0.595，p<0.0001）反映了文献中记载的与年龄相关的唾液成分变化。Nassar等人33报告了年龄相关的唾液蛋白质谱变化，包括保护性蛋白的减少和炎症介质的增加。Johnson等人34记录了与年龄相关的唾液代谢物变化，这归因于唾液腺功能的生理变化。**

**年龄相关的ZFP510增加可能反映了生理变化或年龄相关的癌症易感性。Wong35提出，与年龄相关的分子变化，包括DNA甲基化模式的改变和氧化应激反应，增加了老年人群的癌症风险。然而，年龄本身并不能显著区分健康个体和口腔癌患者，这证实了ZFP510作为疾病特异性诊断标志物的主要作用。**

**令人惊讶的是，ZFP510水平与传统风险因素（吸烟、酒精、咀嚼槟榔）之间没有显著相关性，这与其他关于烟草使用与口腔癌患者唾液炎症细胞因子之间显著相关性的发现相反。这可能反映了我们样本量的相对较小，或者表明ZFP510的升高是由致癌过程而非直接致癌物暴露引起的。**

**ZFP510与组织病理学级别：疾病分期的影响**
ZFP510与组织病理学级别之间的强正相关（r=0.938，p<0.0001）对疾病分期和预后具有重要意义。虽然组织病理学分级仍然是重要的预后指标，但传统的评估依赖于侵入性组织采样，并且存在观察者间变异性。唾液ZFP510与组织病理学级别之间的强相关性表明其作为肿瘤分化状态的非侵入性替代标志物的潜力。**

**低分化与高分化肿瘤之间ZFP510水平的显著差异（p<0.0001），经过多重后续检验确认，为ZFP510在不同组织病理学级别之间的区分能力提供了有力证据。这一发现对于强调基于肿瘤特征的个性化治疗的精准医疗方法尤为重要。**

**高分化与中等分化肿瘤之间没有显著差异（p=0.081），表明存在一个阈值效应，即ZFP510表达主要在晚期肿瘤去分化阶段增加。这一模式与Nguyen等人的36发现一致，他们发现EMT相关标志物在OSCC进展中也存在类似的阈值效应，可能代表了一个关键的分子病理学里程碑。**

**多元回归分析确定组织病理学级别是ZFP510浓度的唯一显著预测因子（R2 = 0.598），强调了ZFP510表达与肿瘤分化状态之间的特定关系，表明与肿瘤去分化相关的生物学机制推动了ZFP510的升高。**

**ZFP510作为唾液生物标志物的出色表现具有重要的临床意义。唾液诊断具有诸多优势，包括减少患者不适、消除与程序相关的并发症以及允许重复采样，这使唾液中的ZFP510成为一种适用于多种临床应用的多功能工具。对于初步诊断而言，ZFP510极高的敏感性和特异性表明其在高风险人群筛查中的潜在价值。当前的口腔癌筛查方法主要依赖于视觉检查和触诊，但这些方法存在较高的检查者间变异性和对早期病变的检测敏感性不足的问题。Lingen等人报告称，传统口腔检查的敏感度仅为50%至75%，这突显了开发更可靠的早期检测策略的必要性。ZFP510与组织病理学分级之间的强相关性表明其还可用于疾病分期和治疗计划制定。ZFP510能够区分不同组织病理学分级，这意味着它可以无创地评估肿瘤的侵袭性，从而可能为高风险患者提供更针对性的治疗建议，并改善治疗效果。ZFP510测量的定量特性使其在疾病监测和治疗监控中发挥作用；通过连续检测唾液中的ZFP510水平，可以及早发现疾病复发或进展的分子证据，从而及时采取干预措施。Wang等人强调了纵向评估唾液生物标志物的潜在价值，能够在临床症状出现之前检测出口腔鳞状细胞癌（OSCC）的复发。我们的研究显示ZFP510作为独立生物标志物的巨大潜力，为患者护理和口腔癌早期检测策略的创新带来了希望。

越来越多的证据表明，微RNA介导的调控网络在癌症发生中起着重要作用，这为解读ZFP510在OSCC中的行为提供了重要的分子背景。与肿瘤进展相关的炎症和转录途径与某些失调的微RNA（如miR-21）有关，这些微RNA会影响多种病理状态下的增殖和免疫反应信号传导，说明小分子调控因子如何驱动广泛的致癌过程。尽管最初是在胎盘和母胎模型中研究的，但新兴的基于微RNA的治疗方法已显示，转录调控因子的异常会改变上皮细胞的稳定性及其侵袭性——这些机制与口腔上皮恶性转化过程中观察到的变化相似。特别是，最近在印度南部OSCC患者队列中的研究表明，miR-34a-3p直接作用于TNF-α（肿瘤坏死因子-α），从而影响肿瘤的微环境信号传导，并反映了特定人群中疾病进展的分子模式。这些研究共同强调了转录和转录后失调在OSCC中的重要性，并与我们研究中观察到的唾液ZFP510水平逐步升高的现象相符，支持其作为肿瘤生物学意义的指标的潜力。

然而，本研究也存在一些局限性。首先，样本量相对较小，且仅来自一家三级医疗机构，这可能限制了结果在更广泛和多样化人群中的普适性。其次，横断面设计仅能捕捉到某一时间点的唾液ZFP510水平，无法反映治疗反应、复发或疾病进展过程中的动态变化。此外，尽管所有OSCC病例都提供了组织病理学分级信息，但并非所有转诊病理中心都能提供完整的TNM临床分期数据，因此无法分析不同临床阶段中的ZFP510表达情况。这一问题已在研究设计中得到注意，并被认为是研究的关键限制。此外，本研究仅关注了唾液中ZFP510的定量检测，缺乏组织水平的验证。通过免疫组化方法在肿瘤组织中证明ZFP510的表达，将有助于强化肿瘤生物学与唾液释放之间的机制联系。包括基因表达或与ZFP510相关的基因组改变在内的分子分析，可以进一步阐明其在OSCC发病机制中的作用。虽然单一生物标志物的评估具有一定的信息价值，但可能无法完全反映OSCC的生物学异质性；结合多标志物检测或蛋白质组学和转录组学特征，可能会提高诊断的准确性。最后，一些重要的临床应用方面的问题（如成本效益、社区层面实施的可行性以及与现有唾液生物标志物的比较）超出了这项横断面研究的范围。需要更大规模的多中心研究，采用标准化方法、组织水平检测和纵向随访，以验证ZFP510的诊断效用，并确定其是否适合纳入常规的口腔癌筛查流程。

总之，唾液是一种宝贵的口腔癌检测工具，本研究揭示了ZFP510作为一种具有高效诊断能力和与肿瘤恶性转化显著相关性的非侵入性生物标志物的潜力。其能够反映疾病的存在和生物学行为，表明它在早期检测、风险分层及未来唾液生物标志物组合中的重要作用。这些发现为在更大规模的人群中进一步验证ZFP510的价值奠定了基础，并支持将基于唾液的诊断方法逐步应用于口腔癌筛查流程。