通过秋水仙素处理，建立紫姬哈克兰 orchid（Dendrobium anosmum Lindl.）的愈伤组织衍生多倍体品系

《Plant Cell, Tissue and Organ Culture (PCTOC)》：Establishment of callus-derived polyploid lines for the Purple Gia Hac orchid (Dendrobium anosmum Lindl.) via colchicine treatments

紫桂兰（Dendrobium anosmum）因过度采挖面临遗传资源危机，本研究通过秋水仙素处理建立多倍体诱导体系。优化处理为50 mg/L秋水仙素浸泡2小时，结合含6-BA和NAA的MS培养基可实现高效不定芽再生（平均株高2.34cm，每株3.33片叶），再生植株呈现茎叶增粗等表型变异，显微分析显示细胞器及结构显著增大，多倍体候选系染色体倍增率达66.19%-84.48%，并观察到花色紫红色加深及斑纹形成。

　　

摘要

紫色Gia Hac兰花（Dendrobium anosmum）是越南最受欢迎的兰花品种之一，由于其极高的观赏价值而遭到过度开发。因此，为了保护和发展这一物种，遗传保护和改良工作至关重要。在植物育种中，基于秋水仙素的倍性诱导方法相比传统杂交技术具有优势，因为它能够克服不孕和不兼容性问题。在这项研究中，我们首次建立了D. anosmum愈伤组织的倍性诱导方案、从秋水仙素处理过的愈伤组织中再生体外小苗的方法，以及这些微繁殖小苗的驯化方法。将愈伤组织浸泡在50 mg/L的秋水仙素溶液中两小时是最优条件，可以获得最高比例的突变表型愈伤组织。添加了1.5 mg/L 6-苄氨基嘌呤和0.5 mg/L α-萘乙酸的MS培养基最适合芽的再生，在培养八周后，平均芽高度（2.34 cm）和每株芽的叶片数量（3.33片）达到最大值。从秋水仙素处理过的愈伤组织中再生的芽表现出形态特征的增大，包括茎和叶的增厚和肿胀。显微解剖学比较显示，与未处理的对照相比，秋水仙素处理过的幼苗/芽的叶表皮细胞、气孔、细胞核和根毛都发生了增大。候选的倍性植株系还表现出色素含量的变化，其花朵具有更鲜艳的紫色和色斑。核型分析证实，候选株系中存在高比例的倍性细胞（66.19–84.48%）。这些结果表明，通过后续选择稳定的倍性植株系，秋水仙素诱导的倍性诱导方法有望改善D. anosmum的观赏价值。