希腊地区克里米亚-刚果出血热病毒与艾盖病毒蜱媒筛查研究

《Viruses》：Screening Ticks for Crimean–Congo Hemorrhagic Fever Virus and Aigai Virus in Greece Katerina Tsioka, Smaragda Sotiraki, Danai Pervanidou, Styliani Pappa, Konstantina Stoikou, Annita Vakali, Chrisovaladou-Niki Kefaloudi, Christina Sapanidou, Panagiota Ligda and Anna Papa + 3 authors

　　

摘要：硬蜱是众多病原体的媒介，其中包括可导致人类严重疾病的克里米亚-刚果出血热病毒（CCHFV）。希腊在2025年报告了两例本土人类克里米亚-刚果出血热病例。本研究旨在更深入地了解希腊境内蜱中CCHFV及其相关艾盖病毒（AIGV）的地理分布和流行率。为此，研究人员检测了2024年从家畜（绵羊、山羊、牛）和环境中采集的680只蜱（135只瑞眼蜱属Hyalomma蜱和545只扇头蜱属Rhipicephalus蜱）的CCHFV和AIGV。结果在12只成年囊形扇头蜱（R. bursa）中检测到AIGV（12/511，2.3%），而所有瑞眼蜱属（Hyalomma）蜱和囊形扇头蜱（R. bursa）若虫对两种病毒检测均为阴性。AIGV阳性蜱于5月和6月在希腊两个相距较远的区域单位内从山羊和绵羊身上采集。源自部分S RNA节段的AIGV序列，在核苷酸和氨基酸水平上分别与原型AIGV毒株（AP-92）相差10.3%和1.4%。需要在“同一个健康”框架下对蜱、人类、野生动物和家畜进行综合监测研究，以更深入地了解希腊克里米亚-刚果出血热的流行病学，同时需要开展临床研究以阐明AIGV对公共卫生的影响。

一、 研究背景、问题与目的

克里米亚-刚果出血热病毒（CCHFV）和艾盖病毒（AIGV）是隶属于正内罗病毒属（Orthonairovirus）的蜱媒病毒。CCHFV是医学上最重要的正内罗病毒，主要由瑞眼蜱属（Hyalomma）蜱传播，可引起人类严重疾病，病死率高达30%。AIGV最近被重新归类为一个独立的物种，包括希腊毒株AP-92及所有相关的“AP-92样”病毒。希腊曾在2008年和2025年报告过本土人类CCHF病例。尽管希腊人群CCHFV血清阳性率较高，但临床病例罕见，这表明大多数血清阳性个体可能接触了非致病性或低致病性的正内罗病毒。因此，需要进行蜱虫研究以明确在希腊流行的正内罗病毒毒株，揭示CCHF在希腊的流行病学之谜。既往研究曾在希腊检测到CCHFV基因型Europe 1和Europe 2（后重分类为AIGV），但CCHFV主要媒介边缘瑞眼蜱（H. marginatum）的数量稀少且检测为阴性。为解决上述问题，本研究旨在通过对希腊的瑞眼蜱属和扇头蜱属蜱进行CCHFV和AIGV筛查，以深入了解这两种病毒在希腊的地理分布和流行率。

二、 关键研究方法

本研究是欧盟健康“OH SURVector”项目的一部分，旨在建立蜱媒病毒病原体的监测系统。研究人员于2024年3月至12月，在希腊9个行政大区的122个农场，从家畜（主要是绵羊和山羊，以及少量牛）及周边环境中采集了共680只瑞眼蜱属和囊形扇头蜱（R. bursa）。所有蜱虫均通过形态学特征进行鉴定。每只蜱单独处理，以防止交叉污染。通过商业实时逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）试剂盒检测CCHFV和AIGV RNA。所有阳性样本进一步通过内部建立的RT-巢式PCR（靶向病毒小（S）RNA节段片段）进行验证，并对PCR产物进行测序和BLAST（Basic Local Alignment Search Tool）分析。此外，利用最大似然法构建了基于S RNA节段片段的系统发育树，以分析病毒序列的遗传关系，并使用地理信息系统（GIS）技术绘制了采样蜱种的地理分布图。

三、 研究结果

3.1. 蜱虫采集

在采集的680只蜱中，鉴定出135只属于瑞眼蜱属（包括105只小坑瑞眼蜱H. excavatum、25只边缘瑞眼蜱H. marginatum和5只亚洲瑞眼蜱H. anatoliticum），545只为囊形扇头蜱（R. bursa）。所有瑞眼蜱均为成蜱，囊形扇头蜱中包括511只成蜱和34只若虫。

3.2. 分子检测

实时RT-PCR阳性结果仅来自成年囊形扇头蜱，而囊形扇头蜱若虫和所有瑞眼蜱检测均为阴性。具体而言，在511只成年囊形扇头蜱中，有12只（2.3%）检测为阳性，Ct值范围为24.84至37.21。经内部RT-巢式PCR和测序确认，这些阳性蜱均携带AIGV。AIGV阳性蜱采集自两个大区：西希腊（位于埃托利亚-阿卡纳尼亚区域单位）和东马其顿-色雷斯（位于克桑西区域单位）。阳性样本主要采集于5月和6月，这与成年囊形扇头蜱在希腊的季节性活动高峰（5月至9月）相符。

3.3. 系统发育分析

对来自9只阳性蜱（分别来自上述两个大区）的S RNA节段220 bp片段进行测序分析。同一大区内的序列完全相同，而两个大区的序列组之间共享99%的核苷酸一致性和100%的氨基酸一致性。与AIGV参考毒株（AP-92和Pentalofos）的遗传距离分析显示存在差异。基于此片段构建的系统发育树显示，本研究检测到的AIGV序列与希腊先前分离的Pentalofos毒株形成一个独立的分支。

3.4. 地理分布

研究绘制了采集到的瑞眼蜱属和囊形扇头蜱的地理分布图。AIGV阳性囊形扇头蜱在两个相距遥远的区域单位（西希腊和东马其顿-色雷斯）的五个地点被检测到，表明了病毒传播具有局灶性和异质性。

四、 讨论与结论

讨论总结：

分子媒介监测对于在人类临床病例发生前检测媒介传播病原体至关重要。本研究中未在采样蜱中检测到CCHFV，但在希腊两个区域单位的囊形扇头蜱中检测到AIGV，成年囊形扇头蜱的总体AIGV RNA检出率为2.3%。与邻近国家（如阿尔巴尼亚、科索沃）的数据相比，希腊的检出率相对较低。AIGV的确切致病性目前尚不清楚，有待未来临床研究阐明。阳性蜱在5月和6月的时间聚集性与成年囊形扇头蜱的季节性活动一致。本研究中边缘瑞眼蜱数量较少，可能源于宿主和生态因素，因为成年瑞眼蜱在地中海国家通常寄生于大型有蹄类动物，而本研究主要从绵羊和山羊身上采样。因此，未来对大型动物和野生动物的监测可能提供更多关于边缘瑞眼蜱分布和CCHFV传播水平的数据。CCHFV和AIGV属于同一属的不同物种，现有的分子和血清学检测方法存在交叉反应，因此测序对于准确区分两者至关重要。两种病毒的主要媒介不同，CCHFV主要由瑞眼蜱属传播，而AIGV则最常与扇头蜱属（主要是囊形扇头蜱）相关。系统发育分析表明，本研究检测到的AIGV序列与希腊的Pentalofos毒株形成了一个独立的进化支。AIGV已在多个巴尔干国家和土耳其的CCHF流行区被检测到，媒介组成和感染流行率受到气候、土地利用和宿主种群复杂相互作用的影响。

研究结论（翻译自原文）：

2024年，在希腊两个区域单位的成年囊形扇头蜱中检测到艾盖病毒（AIGV），而在该样本集中未检测到克里米亚-刚果出血热病毒（CCHFV）。所采集的边缘瑞眼蜱（H. marginatum）数量较少，限制了对CCHFV传播情况的推断。希腊近期人类克里米亚-刚果出血热病例的报告表明，不能排除CCHFV和AIGV共循环的可能性。因此，在“同一个健康”框架下对蜱、人类和动物（家养和野生）进行监测，对于更好地理解希腊克里米亚-刚果出血热复杂的流行病学至关重要。此外，需要进行临床研究来阐明AIGV的致病性和毒力及其对公共卫生的广泛影响。