通过阻断淋巴毒素β受体选择性清除循环效应CD8 T细胞，实现抗CD137疗法疗效与毒性的分离

《SCIENCE ADVANCES》：Selective elimination of circulating effector CD8 T cells via LTβR blockade separates anti-CD137 efficacy from toxicity

本研究致力于解决αCD137免疫疗法在临床转化中面临的核心挑战——分离其强大的抗肿瘤疗效与主要由IFN-γ+CD8 T细胞驱动的肝毒性。研究人员聚焦于淋巴毒素β受体(LTβR)通路，通过遗传学和药理学方法揭示了其通过调控次级淋巴器官(SLOs)中效应CD8 T细胞的凋亡，来维持其全身循环和肝脏浸润。最终，LTβR阻断被证明可有效减轻肝毒性，同时保留肿瘤特异性CD8 T细胞的应答，为改善αCD137疗法的安全性提供了新策略。

　　

在肿瘤免疫治疗领域，CD137（也称4-1BB）是一个备受瞩目的靶点。针对CD137的激动性抗体能够强力激活CD8 T细胞，在多种临床前模型中展现出卓越的抗肿瘤效果。然而，当这种疗法进入临床阶段时，严重的免疫相关不良反应，特别是致命的肝毒性，如同高墙般阻挡了它的前进道路。早期临床试验曾因剂量限制性肝毒性而中止。尽管后续尝试降低剂量或使用较弱的激动剂改善了安全性，但疗效也随之大打折扣。这揭示了一个核心悖论：如何将αCD137疗法对肿瘤特异性CD8 T细胞的保护性作用，与由过度扩增的、非特异性的“旁观者”CD8 T细胞驱动的病理性损伤分离开来？这是将CD137激动剂转化为安全有效疗法的关键瓶颈。

为了破解这一难题，Korchagina, A. 等研究人员在《SCIENCE ADVANCES》上发表了一项研究。他们发现，一群表达CD11c和KLRG1的效应CD8 T细胞（CD11c⁺T_E）是αCD137疗法诱导的肝脏IFN-γ（干扰素-γ）的主要来源。这些细胞在血液和次级淋巴器官（SLOs，如脾脏、淋巴结）之间循环，并在收缩期于SLOs内发生凋亡。研究人员揭示了淋巴毒素β受体（LTβR）信号是这一收缩过程的关键负向调控者。具体机制上，表达淋巴毒素（LT）的B细胞激活了成纤维网状细胞（FRCs）上的LTβR，从而抑制了脾脏中CD11c⁺T_E细胞的凋亡，维持了它们的全身循环和肝脏浸润。药理学上的LTβR阻断能够通过减少产IFN-γ的CD11c⁺T_E细胞的积累来消除肝毒性，同时保留肿瘤特异性CD8 T细胞的应答。这些发现将LTβR确立为效应CD8 T细胞持久性的关键调节因子，并支持使用LTβR拮抗剂来提高αCD137疗法的安全性。

为开展此项研究，作者主要运用了以下几种关键技术方法：1. 使用了多种基因工程小鼠模型，包括条件性敲除LTβR、LTβ或其配体LIGHT的小鼠，以及细胞特异性（如FRCs、B细胞、T细胞、髓系细胞）敲除小鼠，以解析不同细胞在该通路中的作用。2. 建立了αCD137抗体诱导的肝毒性小鼠模型，并利用MC38结肠腺癌皮下移植瘤模型评估抗肿瘤疗效。3. 综合运用了多色流式细胞术、细胞分选、过继性T细胞转移、组织免疫荧光染色和病理学分析来深度表征免疫细胞亚群、表型、分布和功能。4. 通过骨髓嵌合体实验和药理学工具（如LTβR-Fc融合蛋白、FTY720）来验证细胞自主性或微环境的作用。5. 进行了转录组学（RNA测序）和定量PCR分析，以探究基因表达变化。

研究结果

CD11c⁺KLRG1⁺CD8 T细胞是αCD137免疫治疗后肝脏中IFN-γ的主要生产者

研究人员发现，αCD137抗体治疗会导致小鼠血清转氨酶（ALT）升高和肝脏免疫细胞浸润。在浸润的CD8 T细胞中，大多数表达效应细胞标记KLRG1，并可进一步分为CD11c⁺和CD11c^?的效应T细胞（T_E）亚群。其中，CD11c⁺T_E细胞是肝脏中IFN-γ的主要生产者。此外，阻断抑制性受体NKG2A或PD-1会加剧αCD137抗体诱导的肝损伤，并促进肝脏中CD11c⁺T_E细胞的积累。+T_Ecells.">

循环中的CD11c⁺T_E细胞在次级淋巴器官中被清除

CD11c⁺T_E细胞不仅存在于肝脏，也存在于血液、脾脏和淋巴结中，并在这些组织间循环。在αCD137治疗的收缩期，这些细胞在脾脏、淋巴结和肝脏中表现出较强的早期凋亡（annexin V染色阳性），但在血液中凋亡水平较低。使用淋巴细胞迁出抑制剂FTY720将CD11c⁺T_E细胞滞留于淋巴结后，其数量反而减少，且未能累积在肝脏，表明次级淋巴器官的微环境促进了这些效应细胞的清除。+T_Ecells are eliminated in the spleen and LNs via apoptosis.">

FRCs中的LTβR信号促进CD11c⁺T_E细胞的循环和肝内积累

在可诱导性LTβR敲除（iLTβR^Δ）小鼠中，αCD137治疗诱导的CD11c⁺T_E细胞在血液、肝脏、脾脏和淋巴结中的累积显著减少。骨髓嵌合体实验表明，对辐射有抗性的细胞（如基质细胞）上的LTβR信号对这一过程至关重要。进一步，在成纤维网状细胞（FRCs）中特异性敲除LTβR（CCL19^ΔLTβR）的小鼠，其多个组织中的CD11c⁺T_E细胞累积也显著降低，说明FRC细胞上的LTβR信号是促进CD11c⁺T_E细胞循环和积累的关键。+T_Ecells in the liver and SLOs.">

B细胞来源的淋巴毒素促进CD11c⁺T_E细胞的循环和肝内积累

机制上行的研究发现，LTβR的配体LTβ，而非LIGHT，驱动了CD11c⁺T_E细胞的累积。进一步，在B细胞中特异性敲除LTβ（CD19^ΔLTβ）能够显著减少CD11c⁺T_E细胞，而在T细胞中敲除则无此效果。这表明B细胞是提供LTβ信号、维持CD11c⁺T_E细胞累积的关键细胞来源。在荷瘤（MC38结肠癌）小鼠模型中，这一结论依然成立。+T_Ecells.">

LTβR信号减少循环CD11c⁺T_E细胞在脾脏的收缩

LTβR信号如何调控CD11c⁺T_E细胞？研究发现，缺失LTβ并不影响该细胞亚群的增殖能力，但在CD19^ΔLTβ小鼠的脾脏中，其凋亡有增加趋势。过继转移实验证实，在LTβR缺失的受体小鼠体内，供体来源的CD11c⁺CD8 T细胞凋亡增加，在脾脏累积减少，并导致其循环和向肝脏的迁移受损。相反，给予激动性αLTβR抗体可降低脾脏CD11c⁺T_E细胞的凋亡。这些结果说明，LTβR信号通过抑制脾脏微环境中CD11c⁺T_E细胞的凋亡，来限制其收缩，从而维持其全身性存在。+T_Ecells.">

LTβR阻断可消除由αCD137和αPD-1联合免疫疗法诱导的肝毒性

在治疗应用层面，研究人员测试了LTβR-Fc（一种可溶性LTβR拮抗剂）的效果。在αCD137和αPD-1抗体联合治疗的小鼠中，同时给予LTβR-Fc可显著降低血清ALT/AST水平、肝脏IFN-γ表达和免疫细胞浸润。流式分析显示，LTβR阻断选择性地减少了肝脏、脾脏、淋巴结和血液中CD11c⁺T_E细胞（特别是产IFN-γ的亚群）的积累，而对CD11c^?T_E细胞和CD127⁺KLRG1^?的初始/记忆CD8 T细胞亚群影响较小或没有影响。+CD11c⁺T_Ecells in the liver.">

LTβR阻断保留了αCD137和αPD-1联合免疫疗法的抗肿瘤疗效

最后，在MC38荷瘤小鼠模型中评估了LTβR阻断对抗肿瘤疗效的影响。尽管LTβR-Fc治疗降低了循环中的CD11c⁺T_E细胞并减轻了肝毒性，但它并未损害αCD137/αPD-1联合疗法对肿瘤生长的抑制效果，部分小鼠实现了肿瘤完全消退并建立了持久的抗肿瘤记忆。在表达卵清蛋白（OVA）的MC38肿瘤模型中进一步分析发现，LTβR阻断减少了肿瘤内总的CD11c⁺CD8 T细胞，但并未减少OVA特异性（tetramer⁺）的CD8 T细胞数量，且肿瘤特异性细胞中的CD11c⁺比例保持不变。这证明LTβR阻断选择性清除了非肿瘤特异性的“旁观者”效应CD8 T细胞，而保留了关键的肿瘤特异性免疫应答。

研究结论与意义

本研究系统性地阐明了一条调控αCD137免疫疗法毒副作用的关键通路。研究结论指出，次级淋巴器官（特别是脾脏）是清除过度活化的效应CD8 T细胞的重要场所。B细胞通过表达淋巴毒素（LT），激活成纤维网状细胞（FRCs）上的淋巴毒素β受体（LTβR），传递抑制凋亡的信号，从而延缓了CD11c⁺T_E细胞在脾脏的收缩，维持了它们的全身循环和最终在肝脏的病理积累。药理性阻断LTβR信号，可以逆转这一过程，加速“旁观者”效应CD8 T细胞的清除，从而有效分离肝毒性与抗肿瘤疗效。

这项研究的重大意义在于：首先，它从机制上揭示了LTβR是控制效应CD8 T细胞持久性的一个全新关键节点。其次，它提出了一个创新性的治疗策略：通过促进病理性的效应T细胞在次级淋巴器官中的“收缩”，而非全身性抑制免疫，来实现疗效与毒性的“解耦”。这为改善以CD137激动剂为代表的强效免疫刺激疗法的安全性提供了全新的思路和直接的治疗靶点（LTβR）。最后，该研究不仅限于CD137疗法，其揭示的“SLOs作为效应T细胞收缩枢纽”以及“LT-LTβR轴调控此过程”的生物学原理，可能广泛适用于其他由CD8 T细胞驱动的免疫病理过程，如自身免疫病、移植物抗宿主病等，具有广阔的转化医学前景。