海藻酸铵可以抑制由盐负荷加重引起的单侧输尿管阻塞小鼠模型中的疾病进展

《Results in Chemistry》：Ammonium alginate suppresses disease progression exacerbated by salt loading in mouse model of unilateral ureteral obstruction

　　石松亚里娜 | 林勇也 | 岛田刚辅 | 北平友人 | 日冈雄人 | 山口玛丽亚 | 笹本刚 | 敌本纯也 | 扇野淳 | 武畑秀則 | 小寺里沙子 | 田原徹 | 横东泰 | 元山圭一
日本熊本大学药学研究生院，熊本市中央区Oe-honmachi 5-1，862-0973

**摘要**
慢性肾脏病（CKD）显著增加了透析、脑梗死、心血管疾病和肾纤维化的风险，对患者的生活质量和医疗经济构成了重大挑战。过量的盐摄入会增加高血压、中风和CKD等多种慢性疾病的风险。我们最近发现，海藻酸钠（AAL）具有“排盐作用”，能在小鼠盐负荷过量后抑制血液中钠浓度的升高，并促进钠通过粪便排出。在本研究中，我们探讨了AAL诱导的盐排泄对单侧输尿管阻塞（UUO）小鼠模型中盐负荷引起肾纤维化进展的影响。结果发现，AAL的给药显著抑制了由盐负荷引起的尿钠浓度的升高，并减轻了盐负荷加剧的肾纤维化及相关的炎症因子表达。这些结果表明，AAL介导的盐清除机制能够抑制盐负荷所导致的炎症和纤维化的进一步发展。因此，作为一种天然多糖，AAL在食品和医药领域的应用前景广阔，有望减轻患有肾炎症和纤维化（如CKD）患者因盐负荷而产生的不良影响。

**1. 引言**
严重的原发性肾脏疾病（如IgA肾病、糖尿病肾病和药物性肾损伤）会导致肾单位数量不可逆地减少，进而导致肾功能逐渐恶化。终末期肾衰竭需要依赖血液透析等肾脏替代疗法，全球接受这些治疗的患者数量持续增加。CKD患者的肾功能下降往往是不可逆的，治疗的目标是控制疾病的进展。此外，CKD常与糖尿病和高血压等生活方式相关疾病相伴，而“过量食盐摄入”是导致疾病进展的关键因素[1]、[2]、[3]。
纤维化是指细胞外基质的异常积聚，是所有器官慢性组织损伤的常见现象。在肾脏中，无论基础疾病如何，随着损伤的进展，间质空间都会出现纤维化，其严重程度决定了肾脏的预后[4]、[5]、[6]。早期肾损伤中的局部纤维化可能是通过机械稳定受损肾单位并促进修复的机制的一部分；然而，随着损伤发展为慢性过程，纤维化会破坏正常组织结构，最终导致器官功能障碍[4]。因此，肾纤维化被广泛认为是CKD组织损伤的标志。随着CKD患者数量的增加，控制肾纤维化对于开发新的预防和治疗方法至关重要。

**2. 海藻酸钠（AAL）**
海藻酸钠是一种从褐藻细胞质中提取的天然多糖，由1,4-L-葡萄糖醛酸和1,4-D-甘露糖醛酸组成的线性共聚物[7]、[8]。自发现以来，海藻酸钠已被应用于化学、制药、食品和生物化学领域[9]、[10]、[11]、[12]。由于其抗病毒[13]、抗癌[14]、抗辐射[15]、增强免疫力[16]、抗氧化[17]和抗凝血[18]等特性，海藻酸钠能够抑制上皮肝细胞、癌细胞和平滑肌细胞的增殖[14]、[19]、[20]。最近，藤原等人报道，海藻酸钠（AAL）能吸附1%氯化钠处理的小鼠体内的多余盐分，并通过粪便排出[21]。基于这些特性，预计AAL可通过抑制盐负荷引起的尿钠浓度升高及盐负荷加剧的肾纤维化来延缓CKD的进展。因此，我们研究了AAL在单侧输尿管阻塞（UUO）小鼠模型中预防盐负荷引起的肾炎症和/或纤维化的能力，以评估其在CKD治疗中的可行性。

**3. 材料与方法**
**3.1. 材料**
海藻酸钠（AAL，图1A）购自KIMICA公司（日本东京）。标准饮食（产品名称：MF饮食）购自Oriental Yeast有限公司（日本东京）。α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）抗体（GTX100034）和I型胶原α1（Col1a1）抗体（货号：91144）分别购自GeneTex（美国洛杉矶）和Cell Signaling Technology（美国马萨诸塞州）。

**3.2. 动物实验**
所有动物实验均按照熊本大学动物护理与使用伦理委员会的指导和批准进行（批准编号：A2021–149）。小鼠被饲养在12小时光照-黑暗循环的受控环境中。6周大的雄性C57BL/6小鼠采用常规方法进行单侧输尿管阻塞（UUO）操作[22]、[23]。具体操作是在小鼠麻醉状态下，通过结扎左侧输尿管来诱导间质纤维化和肾小管萎缩。实验后将小鼠分为4组：1）对照组：仅提供自来水及自由摄取标准饮食的假手术小鼠；2）UUO组：接受UUO手术并自由摄取自来水和标准饮食的小鼠；3）UUO+NaCl组：接受UUO手术并同时提供1%（w/v）NaCl溶液和标准饮食的小鼠；4）UUO+NaCl+AAL组：接受UUO手术并同时提供1%（w/v）NaCl溶液及含有5%（w/w）AAL的标准饮食的小鼠。14天后，在麻醉状态下对小鼠实施安乐死，收集两侧肾脏用于评估基因表达、蛋白质表达和纤维化进展（图1B）。

**3.3. 尿液和粪便中钠浓度的测定**
收集UUO模型小鼠的尿液和粪便样本，持续24小时。使用Laquatwin-Salt-22 Compact盐度计（HORIBA Advanced Techno，日本京都）测定尿液和粪便中的钠浓度。

**3.4. 组织学和免疫组化分析**
肾脏用10%甲醛中性缓冲液固定，包埋于石蜡中，切成4μm厚的切片，随后用苏木精-伊红（HE）或Picrosirius红染色（参考先前方法[22]）。肾小管损伤的严重程度按先前标准进行评分[24]、[25]、[26]。

**3.5. 实时定量PCR分析**
使用RNeasy Mini Kit（QIAGEN，德国希尔登）从肾脏中提取总RNA，并用ReverTra Ace qPCR RT Master Mix（TOYOBO，日本大阪）和gDNA Remover合成cDNA。实时定量PCR（RT-qPCR）通过Bio-Rad CFX Connect Real-Time System进行，反应条件为95°C孵育10秒、56°C孵育10秒、72°C孵育30秒。mRNA水平以GAPDH为对照进行归一化。PCR引物如下：
GAPDH：正向引物5’-CGACTTCAACAGCAACTCCCACTTTCC-3′，反向引物5’-TGGGTGGTCCAGGGTTTCTTACTCCTT-3′；
COL1A1：正向引物5’-CGCCATCAAGGTCTACTGC-3′，反向引物5’-ACGGGAATCCATCGGTCA-3′；
TGFβ1：正向引物5’-GAAGGACCTGGGTTGGAAGT-3′，反向引物5’-CGGGTTGTGTTGGTTGTAGA-3′；
F4/80：正向引物5’-CGTGTTGTTGGTGGCACTGTGA-3′，反向引物5’-CCACATCAGTGTTCCAGGAGAC-3′；
Lcn2：正向引物5’-GGAACGTTTCACCCGCTTTG-3′，反向引物5’-GTCTCTGCGCATCCCAGTCA-3′；
NF-κB p65：正向引物5’-CACCAAGGATCCACCTCACC-3′，反向引物5’-CTCTATAGGAACTATGGATACTGCG-3′；
TNF-α：正向引物5’-CAAAGGGATGAGAAGTTCCCAA-3′，反向引物5’-CTCTATAGGAACTATGGATACTGCG-3′；
β-Catenin：正向引物5’-GTGCTGGTGACAGGGAAGACA-3′，反向引物5’-GGATGGTGGGTGCAGGAGTTT-3′；
Renin：正向引物5’-GCACCGCTACCTTTGAACGA-3′，反向引物5’-CCACGGGGGAGGTAAGATTG-3′；
AT1：正向引物5’-CCATTGTCCACCCGATGAAG-3′，反向引物5’-TGCAGGTGACTTTGGCCAC-3′；
Wnt4：正向引物5’-GCGTAGCCTTCTCACAGTCC-3′，反向引物5’-CGCATGTGTGTCAAGATGG-3′；
Axin2：正向引物5’-TGAAACTGGAGCTGGAAAGC-3′，反向引物5’-AGAGGTGGTCGTCCAAAATG-3′。

**3.6. 西部印迹分析**
将从肾脏提取的总蛋白（20–40 μg）加载至8%十二烷基硫酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，然后转移至0.45 μm厚的聚乙烯二氟化物（PVDF）膜上（GVS，日本东京）。膜先用含0.1% Tween 20（TBST）的Tris缓冲液中的1%（w/v）非脂牛奶封闭1小时，随后在4°C下与α-SMA和Col1a1一抗孵育过夜。之后用TBST缓冲液洗膜3次（每次5分钟），再与HRP标记的山羊抗兔IgG（ab205718，Abcam，英国剑桥）作为二抗在室温下孵育40分钟。使用Pierce Western Blotting Substrate Plus Kit（Thermo Fisher Scientific，美国伊利诺伊州罗克福德）和FUSION-SOLO.7S.EDGE V.070（VILBER-LOURMAT，法国科莱吉安）检测免疫反应条带。GAPDH（Abcam，英国剑桥）作为内参。

**3.7. 统计分析**
多组比较采用Kruskal-Wallis检验，随后进行Dunn的多重比较检验并应用Bonferroni校正。P值表示经Bonferroni调整后的p值，p<0.05被认为具有统计学意义。两组比较采用Mann-Whitney U检验，p<0.05被认为具有统计学意义。所有数据以平均值±标准误差（S.E.）表示，中位数用黑色水平线标示。

**4. 结果与讨论**
**4.1. AAL对UUO模型小鼠盐吸附的抑制作用**
我们选择单侧输尿管阻塞（UUO）模型，因为该模型模拟了人类的梗阻性肾病，且UUO模型小鼠在整个阻塞期间表现出间质纤维化和肾小管萎缩的进行性增加[22]。本研究旨在探讨AAL在UUO模型小鼠中的盐吸附作用，评估喂食含AAL饮食和盐溶液的小鼠14天后的尿液和粪便中的盐浓度（图2）。我们此前发现，AAL能吸附口服1%氯化钠溶液的健康小鼠体内的盐分；初步研究还表明，当AAL浓度为5%时其盐吸附效果优于2.5%[21]，且在5%至10%之间达到平台期（S1图）。因此，实验中将AAL和盐的浓度分别设定为5%和1%。结果发现，UUO+NaCl组的尿钠浓度显著高于对照组和UUO组（图2A），而AAL处理组（UUO+NaCl+AAL）的尿钠浓度低于UUO+NaCl组。相反，AAL处理显著增加了粪便中的钠排泄量（图2B）。此外，实验期间UUO处理组的小鼠体重没有显著变化，说明它们正常摄取了含AAL的饮食和盐溶液（S2图）。这些结果表明，AAL显著抑制了UUO模型小鼠尿钠浓度的升高，并增加了粪便中的钠排泄量（图2）。

**4.2. 盐负荷和AAL对肾炎症的影响**
使用苏木精-伊红（H&E）染色检查UUO手术后14天的肾脏组织学变化，发现UUO组和UUO+NaCl组的肾髓质和皮质出现由于肾小管扩张导致的空泡化（图3A）。相比之下，AAL处理组（UUO+NaCl+AAL）的病理变化较轻。这些结果表明，AAL能够抑制盐负荷的UUO模型小鼠中的肾小管扩张（图3A，S1表）。此外，AAL还减少了盐负荷导致的小鼠尿量增加（图3B）。这表明AAL可以通过改善肾小管扩张来缓解疾病早期的尿量增加。下载：下载高分辨率图像（228KB）下载：下载全尺寸图像图3. 在盐负荷和AAL处理后，对UUO模型小鼠的肾脏组织（A）和尿量（B）进行组织学分析。组织学分析使用苏木精和伊红（H&E）染色进行。（A）所有四个实验组的代表性图像。刻度尺=100μm。（B）每个值代表3-8次实验的平均值±标准差，中位数用黑色水平线表示。*p<0.05，与未处理组相比。?p<0.05，与UUO组相比。#p<0.05，与UUO+NaCl组相比。3.3. 盐负荷和AAL处理对肾炎症相关基因表达的影响小鼠F4/80是表皮生长因子（EGF）-七跨膜（TM7）家族的成员，是一种仅表达在巨噬细胞表面的细胞表面糖蛋白。它作为组织中成熟巨噬细胞的标志物。此外，还研究了其他与炎症相关的基因表达，如脂联素2（Lcn2）、NF-κB p65和肿瘤坏死因子（TNF）-α mRNA。通过qPCR分析评估了肾脏中F4/80和Lcn2 mRNA的表达与肾炎症的相关性。与未处理组相比，UUO组中的F4/80和Lcn2 mRNA表达显著升高（图4A-C）。此外，在盐负荷组（UUO+NaCl）中，F4/80和Lcn2 mRNA的表达也有所增加。然而，在AAL处理组（UUO+NaCl+AAL）中，F4/80和Lcn2 mRNA的表达增加被显著抑制（图4A-C）。在NF-κB p65和TNF-α mRNA表达系统中也获得了类似的结果（图4D，E）。这些结果表明，AAL通过抑制盐负荷UUO模型小鼠中的巨噬细胞成熟来抑制肾炎症。下载：下载高分辨率图像（192KB）下载：下载全尺寸图像图4. 盐负荷和AAL处理对UUO模型小鼠中肾炎症相关因子mRNA表达水平的影响。（A）F4/80 mRNA，（B）Lcn2 mRNA，（C）NF-κB p65 mRNA和（D）TNF-α mRNA。每个值代表3-10次实验的平均值±标准差，中位数用黑色水平线表示。*p<0.05，与未处理组相比。?p<0.05，与UUO组相比。#p<0.05，与UUO+NaCl组相比。3.4. AAL处理对UUO模型小鼠肾纤维化的影响转化生长因子-β（TGF-β）是大多数（如果不是全部）慢性肾病（CKD）类型中导致纤维化的主要因素[27]。因此，我们评估了UUO模型小鼠中的纤维化相关基因表达。如图5所示，与未处理组相比，UUO组中纤维化相关因子如TGF-β1、Wnt4、β-连环蛋白和轴蛋白2（Axin2）的mRNA表达显著升高，在UUO+NaCl组中更高。重要的是，这种增加在AAL处理组（UUO+NaCl+AAL）中被抑制（图5A–D）。此外，为了评估肾素-血管紧张素系统的作用，我们通过qRT-PCR评估了肾素和血管紧张素II型1受体（AT1）mRNA的表达。如图5E和F所示，UUO+NaCl组中肾素和AT1的mRNA表达显著增加，表明NaCl增强了肾素-血管紧张素系统，从而导致炎症和肾纤维化。同时，AAL处理组（UUO+NaCl+AAL）显著抑制了肾素和AT1 mRNA水平的增加。总体而言，这些数据表明AAL通过抑制盐负荷UUO模型小鼠中的巨噬细胞成熟来抑制纤维化相关因子的mRNA表达增强。下载：下载高分辨率图像（250KB）下载：下载全尺寸图像图5. 盐负荷和AAL处理对UUO模型小鼠中纤维化相关因子mRNA表达的影响。（A）TGF-β1 mRNA，（B）Wnt4 mRNA，（C）β-连环蛋白 mRNA，（D）Axin2 mRNA，（E）肾素 mRNA和（F）AT1 mRNA。每个值代表3-9次实验的平均值±标准差，中位数用黑色水平线表示。*p<0.05，与未处理组相比。?p<0.05，与UUO组相比。#p<0.05，与UUO+NaCl组相比。I型胶原α1链（Col1a1）的过度积累已知会促进纤维化病理的发展，特别是在CKD中。为了确定盐吸附和AAL处理对肾纤维化病理的抑制作用，我们分别使用qRT-PCR和Western blotting评估了Col1a1 mRNA和蛋白表达。与未处理组相比，UUO组中Col1a1 mRNA和蛋白水平显著升高；在UUO+NaCl组中这些水平进一步升高。然而，在AAL处理组（UUO+NaCl）中，Col1a1 mRNA和蛋白水平显著下降（图6A，B）。为了进一步验证AAL对肾纤维化的抑制作用，我们对盐负荷和AAL处理后的UUO模型小鼠的肾脏组织进行了Picrosirius红染色。Picrosirius红染色的胶原阳性区域量化显示，UUO组中的肾纤维化区域增加，在UUO+NaCl组中进一步增加。相比之下，AAL处理组中的肾纤维化区域没有增加（图6C，D），表明AAL处理可能抑制了盐负荷在UUO模型小鼠中诱导的胶原沉积。下载：下载高分辨率图像（190KB）下载：下载全尺寸图像图6. 盐负荷和AAL处理对UUO模型小鼠中胶原沉积的影响。（A）使用qRT-PCR测定Col1a1 mRNA水平。（B）使用Western blotting测定Col1a1蛋白水平。（C）肾脏切片的Picrosirius红染色。显示代表性图像。刻度尺=100μm。（D）Picrosirius红染色的胶原阳性区域量化。每个值代表3-4次实验的平均值±标准差，中位数用黑色水平线表示。*p<0.05，与未处理组相比。?p<0.05，与UUO组相比。#p<0.05，与UUO+NaCl组相比。（关于此图例中颜色的解释，请参阅本文的网络版本。）3.5. AAL处理对UUO模型小鼠中肾肌成纤维细胞激活的影响肌成纤维细胞包括成纤维细胞的上皮-间充质转化（EMT）细胞、上皮细胞和内皮细胞。激活的肌成纤维细胞产生细胞外基质，并显著促进肾纤维化的进展[28]，[29]。因此，为了评估盐负荷和/或AAL处理后UUO模型小鼠肾组织中肌成纤维细胞的激活情况，我们使用Western blotting量化了α-SMA的增加，因为激活的肌成纤维细胞的特点是α-SMA表达增加。如图7A所示，与未处理组相比，UUO组中α-SMA蛋白表达（指示激活的肌成纤维细胞）显著升高，在UUO+NaCl组中进一步升高。相比之下，这种增加在AAL处理组（图7A）中被显著抑制。使用α-SMA抗体进行的免疫组化染色分析也得到了类似的结果（图7B）。这些结果表明，AAL可能抑制盐负荷在UUO模型小鼠中诱导的肌成纤维细胞激活。下载：下载高分辨率图像（343KB）下载：下载全尺寸图像图7. 盐负荷和AAL处理对UUO模型小鼠中肌成纤维细胞激活的影响。（A）使用Western blotting测定α-SMA蛋白水平，并量化了不同处理组的条带强度。（B）对肾组织切片中表达的α-SMA进行免疫染色。量化α-SMA阳性区域。显示代表性图像。刻度尺=100μm。每个值代表3-8次实验的平均值±标准差，中位数用黑色水平线表示。*p<0.05，与未处理组相比。?p<0.05，与UUO组相比。#p<0.05，与UUO+NaCl组相比。最近，Fujiwara等人报告称，AAL由于含有尿酸的羧基团而具有高的离子交换反应，从而降低了健康小鼠的血液NaCl浓度并诱导了NaCl的排泄[21]。在这项研究中，AAL显著抑制了盐负荷UUO模型小鼠中尿盐浓度的增加（图2）。这可能归因于离子交换反应。为了研究本研究中观察到的抗炎和抗纤维化效应是否可归因于NaCl排泄的增加，我们对UUO小鼠或UUO+NaCl小鼠进行了AAL处理，并比较了其对主要炎症和纤维化相关因素（包括F4/80、TNF-α、β-连环蛋白、Wnt、肾素和Col1a1 mRNA）的影响（图8）。结果表明，AAL对所有检查因素的抑制作用在UUO+NaCl小鼠中比在UUO小鼠中更为显著，这表明AAL的盐排泄起到了我们假设的作用。值得注意的是，AAL在未负荷盐的UUO小鼠中也表现出抗炎和抗纤维化作用。这些发现表明，AAL通过其内在的药理作用和盐吸附的协同作用改善了UUO+NaCl小鼠的病理状况。据报道，藻酸盐在口服后可以调节肠道微生物群，从而抑制NF-κB并激活核因子红细胞2相关因子2（Nrf2），从而减轻炎症和纤维化[30]，[31]，[32]，[33]。基于这些发现，类似的机制可能有助于解释本研究中观察到的炎症和纤维化的抑制作用，即使在无盐负荷的情况下也是如此。需要进一步的体外和体内研究来明确AAL发挥作用的机制。AAL可能在损伤早期阶段表现出更明显的抗炎作用，而在疾病进展的后期阶段，当纤维化重构已经建立时，其抗纤维化作用可能更加明显。在这项研究中，盐负荷和治疗的同时进行；然而，改变治疗干预的时间，以及详细分析不同治疗方案和持续时间下每个因素的时间变化，将有助于阐明AAL的作用机制。下载：下载高分辨率图像（187KB）下载：下载全尺寸图像图8. AAL对（A）F4/80，（B）TNF-α，（C）β-连环蛋白，（D）Wnt，（E）肾素和（F）Col1a1在UUO小鼠或UUO+NaCl小鼠中的抑制作用。mRNA表达水平以相对值（%）表示，相对于未经治疗的UUO或UUO+NaCl小鼠的表达水平。每个值代表3-8次实验的平均值±标准差，中位数用黑色水平线表示。*p<0.05，与AAL处理的UUO小鼠相比。在纤维化过程中，胶原蛋白（ECM）中的胶原、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和糖胺聚糖的沉积增加[34]。在研究结束时（UUO诱导后14天）收获的肾脏显示出小管明显扩张、刷状边界丧失、近端和远端小管细胞受损以及间质浸润（图3）。NF-κB和TGF-β信号通路也参与UUO模型小鼠的炎症和肾纤维化[27]，[35]，[36]。当前研究的结果共同表明，AAL通过盐吸附抑制了UUO模型小鼠中肾炎症和纤维化的进展（图3，图4，图5，图6，图7，图8）。由于很少有动物模型能够充分再现CKD相关的肾纤维化的临床特征，因此需要在多个模型中进行验证。在这项研究中，我们仅使用了UUO模型，这是一个公认的肾纤维化模型；然而，它主要反映的是梗阻性肾病，可能无法完全捕捉其他主要CKD病因（如糖尿病或高血压性肾病）的复杂病理生理学。因此，在将这些发现推广到更广泛的CKD背景时需要谨慎。未来的研究应在额外的CKD相关模型（如缺血-再灌注损伤（IRI）、叶酸肾病和腺嘌呤诱导的CKD）中确认这些发现。此外，本研究中的肾功能评估仅限于 tubular损伤和尿量的改善。除了这些参数外，未来研究还应评估其他功能终点，如肾重量比、血浆电解质、渗透压以及不同模型中的肌酐和血尿素氮，以提供更全面和转化性的理解。此外，应该注意的是，本研究中的一些实验样本量相对较小（n=3-4），这可能会限制统计效力并增加I型和II类错误的风险。因此，应对这些发现持谨慎态度，未来的研究需要更大的样本量来进一步验证这些观察结果。为了进一步增强我们研究成果的可靠性和展示其转化潜力，我们还计划进行人体临床试验。试验方案将规定在用餐前或用餐期间立即给予AAL，因为当AAL存在于胃肠道中时，其盐吸附效果最为显著。除了AAL之外，目前还有几种海藻酸盐被应用于食品中，包括藻酸钠（SAL）、藻钾素（PAL）和藻酸钙（CAL）。藻酸钠既可用作食品添加剂中的增稠剂，也可在制药领域作为胃黏膜保护剂使用；此外，它还具有降低血液胆固醇水平的作用[38],[39],[40]。然而，长期过量摄入藻酸钠会导致体内钠含量升高，从而增加患高血压的风险[41]，这可能会加重肾功能损伤。藻钾素同样具有增稠和凝胶化作用，可用作藻酸钠的替代品[42]。藻钾素的一个主要特点是它会在消化道中分解为藻酸和钾，而分离出的钾会与体内的钠结合，随后被排出体外，因此有助于促进钠的排泄。事实上，Fujiwara等人已经证明藻钾素的盐吸附能力与AAL相当[21]。但由于藻钾素会释放钾，而钾的积累可能引发慢性肾功能衰竭，因此对于抑制盐负荷引起的慢性肾病（CKD）进展来说，AAL比藻酸钠或藻钾素更为合适。相比之下，多项研究表明藻酸钙可以通过抑制胆汁酸重吸收和α-葡萄糖苷酶活性来降低血液中的胆固醇和葡萄糖水平[43],[44],[45]。Fujiwara等人也发现，藻酸钙在降低小鼠血液中NaCl浓度和促进NaCl排泄方面与AAL具有相似的效果[21]。因此，我们计划研究藻酸钙是否也能像AAL一样在动物模型中预防盐负荷引起的CKD恶化。

**4. 结论**
本研究发现，AAL能够抑制盐负荷引起的UUO小鼠模型中的肾脏炎症和纤维化，从而验证了我们的假设，即AAL能够抑制盐负荷加剧的肾脏炎症和纤维化进程。由于能够临床反映CKD相关肾脏纤维化的动物模型较少，因此在多个动物模型中进行实验是非常必要的。在本研究中，我们仅使用了UUO这一代表性的肾脏纤维化模型，但未来还需要在其他肾脏纤维化模型（如IRI模型）中进行验证。此外，还需要设计更多精心研究，以探讨AAL对盐负荷导致的CKD进展的缓解效果。

**作者贡献声明**
Ishimatsu Arina：方法学、研究、概念化。
Hayashi Yuya：方法学、研究、概念化。
Shimada Gosuke：研究。
Kubohira Yuto：研究。
Higa Yuto：研究。
Yamaguchi Maria：研究。
Shuto Tsuyoshi：研究。
Horizono Jun：研究。
Takeshita Hidenori：研究、概念化。
Onodera Risako：研究。
Taharabaru Toru：研究。
Higashi Taishi：方法学、概念化。
Motoyama Keiichi：写作——审稿与编辑、初稿撰写、指导、研究、概念化。