《Veterinary Immunology and Immunopathology》：Emergence of Dirofilaria immitis in humid coastal zones: Epidemiological predictors and molecular characterization
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针对巴西东北部沿海旅游区、此前被视为非流行区的犬恶丝虫（Dirofilaria immitis）流行情况不明的问题，研究人员开展了一项横断面研究，探究了其流行率、相关风险因素及分子特征。研究证实了该病原在当地的传播，揭示了环境与管理因素在传播中的作用，并发现高比例的无症状携带者，强调了区域监测和预防策略的必要性。
在巴西东北部巴伊亚州，有一座风景如画的沿海旅游城市——伊列乌斯（Ilhéus）。这里气候湿热，植被茂密，是度假的好去处。然而，对于生活在此的狗狗们来说，这片美丽的土地可能潜藏着一种致命的威胁：犬心丝虫病。这种由犬恶丝虫（Dirofilaria immitis）引起的寄生虫病，通过蚊子（如库蚊）叮咬传播，不仅严重危害犬只健康，也具有人兽共患的潜在风险。过去二十年，伊列乌斯曾被一项研究认为是无犬恶丝虫的“净土”。但近年来，当地兽医在例行诊疗中开始发现临床病例，这令人警觉：是病原悄悄入侵，还是生态变化为其传播打开了大门？这种地理范围的扩张，在巴西其他沿海地区已有报道，但在伊列乌斯尚缺乏确凿证据。了解其是否在当地流行、哪些因素助长了传播，对于制定有效的“一体化健康”（One Health）防控策略至关重要。
为了回答这些问题，由Ana Clara M.P. Monteiro等人领导的研究团队在伊列乌斯市开展了一项横断面研究，相关成果发表在《Veterinary Immunology and Immunopathology》期刊上。他们旨在首次确认该地区犬恶丝虫的流行情况，阐明相关的风险因素，并对当地分离株进行分子特征分析，以评估其遗传背景。
为开展此项研究，作者主要运用了以下几项关键技术方法：首先，研究采用了横断面设计，在伊列乌斯市不同区域随机采集了481只家犬的血液样本。诊断方面，同时使用SNAP? 4Dx? Plus试剂盒检测成虫抗原，以及改良Knott氏试验（Modified Knott's test）检测血液中的微丝蚴。对于风险因素分析，利用问卷调查收集犬只生物学特征、饲养管理及环境数据，并通过逻辑回归和空间分析（使用QGIS软件）进行统计学评估，其中特别引入了归一化差异植被指数（Normalized Difference Vegetation Index, NDVI）来衡量植被覆盖与感染风险的关系。在分子分析部分，对至少一项诊断试验呈阳性的样本，使用针对线粒体细胞色素c氧化酶亚基1（cytochrome c oxidase subunit 1, cox1）基因的引物进行常规PCR（Polymerase Chain Reaction, 聚合酶链式反应）扩增和测序，并基于最大似然法构建系统发育树，以确定虫种并分析其遗传关系。
研究结果
1. 流行率与诊断一致性
研究共检测了481只犬。使用抗原检测（SNAP? 4Dx? Plus）的血清阳性率为16.0%，而通过改良Knott氏试验检出的微丝蚴血症率为14.3%。在同时接受两种方法检测的428只犬中，综合流行率（任一检测阳性）为19.6%。两种检测方法之间具有几乎完美的一致性（Kappa值 = 0.89）。值得注意的是，在抗原阳性的犬中，有相当一部分（23/77）未检出微丝蚴，属于隐性感染（occult infection）；同时，也有少量犬（11/428）仅微丝蚴检测阳性而抗原阴性。
2. 感染的风险因素
风险因素分析以抗原检测结果为标准结局。研究发现：
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动物自身因素：犬的体型是显著风险因素。与小型犬相比，中型犬和巨型犬血清阳性的概率显著更高。性别、年龄、被毛长度等因素则无显著关联。
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环境因素：犬在户外停留的时间与感染风险呈渐进式增加。完全在户外的犬感染风险最高。对于在户外的犬，没有狗舍可用会显著增加感染风险。能够自由出入（散养）也是一个风险因素。家庭环境方面，居住在有庭院的房屋、位于农村或城乡结合部、以及住所附近有积水，均与更高的血清阳性率显著相关。
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空间与植被因素：感染病例在市内分布不均匀，南部区域（特别是South III分区）呈现明显的聚集性，血清阳性率显著高于中部地区。空间分析显示，血清阳性犬所在住所周边的NDVI中位数（0.51）显著高于阴性犬，表明植被覆盖更密集的区域风险更高。
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饲养管理因素：近期（一年内）接种过多联疫苗与较低的血清阳性率相关。此外，同一家庭中曾有其他宠物感染心丝虫病史，是当前犬只感染的一个强风险因素。
3. 临床特征
大多数血清阳性犬（71.4%）在评估时被报告为无症状。疲劳、咳嗽等症状在抗原阳性和阴性犬中均有报告，但与犬恶丝虫感染无显著关联。
4. 分子特征与系统发育分析
对诊断阳性的样本进行cox1基因PCR和测序，成功获得45个高质量序列。所有序列彼此间100%相同。系统发育分析将这些伊列乌斯分离株置于犬恶丝虫的主要进化支内，与来自世界其他地区的菌株具有高度的遗传相似性，证实了虫种身份，并表明本地循环的虫株遗传上较为保守。
结论与讨论
本研究首次在伊列乌斯市的犬中确认了犬恶丝虫的循环，表明这个先前被认为非流行的地区现已具备该寄生虫传播循环所需的生态条件。这支持了犬心丝虫病在巴西，特别是热带沿海地区，流行区域正在扩大的观察。
研究揭示的关键发现包括：首先，证实了流行。综合流行率19.6%表明该病在当地已确立。其次，突出了隐性感染和联合诊断的重要性。高比例的仅抗原阳性（隐性感染）病例凸显了抗原检测在诊断中的价值，而少量仅微丝蚴阳性的病例则提示可能存在其他丝虫物种感染或抗原-抗体复合物干扰，强调了结合血清学和寄生虫学方法进行综合临床诊断的必要性，这与美国心丝虫协会的指南一致。第三，阐明了多层次的风险因素。感染风险与犬的体型（大型犬风险更高）、户外暴露程度（时间越长风险越高）、以及特定的家庭环境特征（如无狗舍、有积水、植被茂密、农村环境）密切相关。这些因素共同指向了增加蚊子叮咬暴露机会是核心机制。空间分析进一步将高风险区域定位在植被茂密的南部，NDVI分析为此提供了量化支持。第四，揭示了无症状感染的普遍性。大多数感染犬无症状，这警示了即使在无临床表现的犬群中，也可能存在作为传染源的个体，强调了在流行区即使对无症状犬进行常规筛查的重要性。第五，明确了分子特征。分子分析确认了当地虫株为犬恶丝虫，且与全球其他地区的虫株遗传高度相似，表明当前传播的虫株在遗传上保守，未发现独特变体。这为未来的基因组监测建立了基线。
总之，这项研究不仅填补了伊列乌斯地区犬恶丝虫流行病学数据的空白，也深刻揭示了环境、动物管理和宿主因素在寄生虫传播中的复杂相互作用。研究结果强调了在类似伊列乌斯这样具有有利生态条件（湿热气候、茂密植被、旅游人流）的地区，实施基于风险的预防策略、加强宠物主人教育、开展定期筛查和媒介控制的重要性。该研究为兽医、公共卫生部门和宠物主人敲响了警钟，并为制定针对性的监测和防控计划提供了关键的科学依据。
