Trueperella abortisuis 对猪精液在 16°C 下储存长达 4 天后的质量影响

《Theriogenology》：Effects of Trueperella abortisuis on extended boar semen quality when stored at 16°C for up to 4 days

　　

E. Bussalleu|G.C. Althouse

细胞生物学领域，赫罗纳大学生物系，西班牙加泰罗尼亚赫罗纳17071

摘要

Trueperella abortisuis是一种细菌，最初从母猪的流产组织中分离出来，最近也在公猪的精液中检测到。本研究探讨了不同精子与T. abortisuis比例对精液质量的影响，实验在16°C下进行，存储时间为4天。研究人员评估了6头成熟杂交公猪的精液质量，并使用商业培养基将其稀释至40 x 10⁶精子/毫升的浓度。随后将稀释后的精液与T. abortisuis按20:1、10:1、8:1、6:1、4:1、2:1、1:1和1:10的比例混合。在接种前以及接种后24小时、48小时、72小时和96小时，分别检测了精子的总活力和前进活力、精子顶体完整性、精子凝集情况以及细菌数量。此外，在接种前和接种后48小时及96小时还进行了详细的精子形态学分析。统计分析采用单因素重复测量方差分析（显著性水平P<0.05）。

总体而言，T. abortisuis对精液质量产生了多种不良影响。在40 x 10⁶精子/毫升的浓度下，当细菌浓度为约1.03 x 10⁷ cfu/mL（比例1:1）时，24小时后精子的前进活力和凝集现象显著下降（P<0.05）。在细菌浓度为约3.46 x 10⁶ cfu/mL（比例2:1）时，48小时后精子的总活力出现负向变化（P<0.05）。当细菌浓度为2.28 x 10⁹ cfu/mL（比例1:10）时，48小时后精子活力下降（P<0.05）；而在细菌浓度至少为4.94 x 10⁹ cfu/mL（比例1:10）时，96小时后观察到精子顶体损伤增加（P<0.05）。因此，T. abortisuis似乎能够以时间和浓度依赖的方式对精液质量产生负面影响。

引言

某些细菌存在于储存的公猪精液中可能会影响精液的质量和保存期限[1]、[2]。精液中的细菌感染[3]会导致精子运动能力受损、精子质膜完整性下降、线粒体膜电位改变、细胞凋亡率增加、顶体损伤以及其他非细胞效应[4]。用于繁殖计划的储存精液中的细菌污染还可能对母猪的生育能力产生负面影响，包括妊娠失败[1]、授精后外阴分泌物[1]、子宫内膜炎[5]、全身性感染和/或疾病[6]以及产仔数减少[7]。目前已知的污染来源包括环境、人员（如精液采集和处理过程中）以及公猪本身[1]、[2]。

研究表明，细菌对精液质量的影响通常既与浓度有关，也与时效相关[1]、[8]、[9]、[10]。例如，使用Escherichia coli进行的体外实验表明，约1x10⁷ cfu/mL的细菌浓度会对精液质量产生负面影响[11]；而在使用Staphylococcus aureus的人体研究中，精子与细菌的比例为50:1时也会影响精液质量[12]。对于储存的公猪精液而言，时间是一个关键因素，因为这些精液通常在15-19°C下储存长达一周，以便用于繁殖计划。

Trueperella abortisuis（以前称为Arcanobacterium abortisuis）是一种革兰氏阳性、短小的类白喉菌，最初由Azuma等人在日本从母猪的流产胎盘中分离出来[13]，随后在英国[14]、德国[15]、[16]、苏格兰[17]和美国[18]的流产猪仔中也发现了这种细菌。此外，在山羊[19]、狗[20]和猫[21]等其他哺乳动物的流产胎儿中也发现了该细菌的存在。

先前的研究已经证实，在常规微生物筛查中发现了Trueperella abortisuis存在于储存的公猪精液中[3]。据作者所知，目前尚未评估Trueperella abortisuis对储存精液质量的影响。因此，本研究的目的是探讨不同精子与T. abortisuis比例在16°C下储存4天期间对精液质量的影响，并确定导致精液质量下降的细菌阈值。

节选

储存精液的接种

通过戴手套的手法收集了6头性成熟杂交公猪的精液（每周两次），并使用含有200mg/L庆大霉素的BTS稀释剂（IMV Technologies，法国）将其稀释至40 x 10⁶精子/毫升的浓度。每头公猪的新鲜稀释精液被分成对照组和不同精子与细菌比例组（见下文）。使用的T. abortisuis菌株对该稀释剂具有抗性

结果

结果显示，在某些时间点，对照组和处理组之间存在差异。在任何处理之前，6份精液的平均总活力和前进活力分别为88.13%（±3.14%）和56.63%（±2.32%），平均精子存活率为85.49%（±2.05%），精子顶体损伤率为4.17%（±1.33%），精子凝集评分为10%（±0.88%）。各公猪的精液质量参数之间没有显著差异

讨论

在首次从公猪精液中分离出T. abortisuis的种猪场，进行了一项前瞻性研究，以确定这种细菌是来自环境还是公猪本身

CRediT作者贡献声明

Eva Bussalleu：撰写 – 审稿与编辑，撰写 – 原稿，方法学设计，实验实施，数据分析，概念构思。Gary C. Althouse：撰写 – 审稿与编辑，撰写 – 原稿，监督，资源协调，项目管理，方法学设计，资金筹集，数据分析，概念构思。

作者声明他们没有已知的利益冲突或个人关系可能影响本文的研究结果。

致谢

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