火雪祛疾药泥通过抑制血小板中NLRP3炎性小体介导的炎症反应，从而减缓深静脉血栓的形成

《Tissue and Cell》：Huoxue Qushi medicine mud attenuates the deep venous thrombosis formation through inhibiting the NLRP3 inflammasome-mediated inflammatory responses in platelets

　　

陈亚辉|鲍兆丹|李艳|罗连欣|蔡俊杰|王崇印|罗琼

中国宁波市第六医院中医科，宁波315040

摘要

背景

中医在深静脉血栓形成（DVT）的治疗中显示出显著的效果。本研究探讨了活血祛瘀方（HXQS）对DVT的治疗效果及其机制，重点关注了核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族中的pyrin结构域3（NLRP3）的激活作用。

方法

采用高效液相色谱法（HPLC）检测活血祛瘀方药泥中的活性成分。通过下腔静脉结扎建立DVT小鼠模型，并将活血祛瘀方药泥施用于穴位（足三里、三阴交和太冲），同时使用肝素（UFH）作为阳性对照。通过过表达NLRP3的慢病毒（oe-NLRP3）来评估活血祛瘀方对DVT中NLRP3激活的具体机制。采用苏木精-伊红（HE）染色观察静脉血管组织，使用PAP8聚集仪检测血小板聚集水平，流式细胞术检测CD41⁺血小板微粒的比例、血小板-中性粒细胞聚集情况以及P-选择素的水平，ELISA检测炎症细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α和IL-10）的水平，Western blotting检测血小板中NLRP3炎性小体相关蛋白（NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18）的蛋白水平。

结果

HPLC检测结果显示活血祛瘀方药泥中含有抗血栓成分（绿原酸、苦杏仁苷和红花黄）。活血祛瘀方能够减少DVT小鼠的血栓形成、血浆微粒、血小板聚集和P-选择素水平。该方剂还能降低NLRP3炎性小体相关蛋白（NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18）及炎症细胞因子（IL-1β和TNF-α）的水平。oe-NLRP3慢病毒注射可阻断这些变化。

结论

活血祛瘀方通过抑制NLRP3炎性小体驱动的炎症反应，表现出抗血栓效果，为DVT的预防和干预提供了新的思路。

引言

静脉血栓栓塞症（VTE），包括深静脉血栓形成（DVT）和肺栓塞（PE），是继心肌梗死和中风之后导致血管死亡的第三大原因（Weitz和Chan，2020年）。DVT有发展成PE的风险，可能危及生命（Vyas等人，2024年）。研究表明，DVT的年发病率在每10万人年50至120例之间（Wolf等人，2024年）。预计未来20年DVT的发病率将继续上升（Wolf等人，2024年）。在接受手术的患者中，DVT的发病率更高，骨科手术中可达60%（Saleh等人，2017年），结直肠癌手术中为11%（Wei等人，2023年）。因此，有效的DVT预防和干预措施极为重要。常用的抗凝药物如肝素（UFH）、低分子肝素和华法林能显著降低DVT的风险；然而，DVT的发病率仍然较高（Yan等人，2025年）。此外，这些抗凝药物存在出血等副作用（Dadwal等人，2020年；Levy等人，2024年）。因此，亟需开发新的DVT治疗药物。

中医在多种疾病中显示出重要作用，包括血栓形成。中医主要使用天然植物，具有更好的治疗效果和较低的毒性和不良反应（Zhang等人，2022年）。一些中药，如丹参、川芎、红花和三七及其活性成分，已显示出明显的抗凝效果（Yin等人，2023年）。有研究指出，中医与抗凝药物联合使用可减少出血事件（Hsu等人，2022年），这突显了中医在血栓形成治疗中的优势。活血祛瘀方常用于治疗血管疾病（Chen和Shao，2016年）。一项研究表明，活血祛瘀方煎剂可增强DVT患者血清中的组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）、蛋白C和蛋白S的活性，提高临床治疗效果（Xiao等人，2019年）。活血祛瘀方由桃仁、红花、川芎、当归、赤芍、网脉枫香、牛膝、苍术和黄柏组成。其中，川芎和红花已被证明具有明显的抗凝效果（Yin等人，2023年）。

先前的研究表明，核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族中的pyrin结构域3（NLRP3）在调节血栓性疾病模型中起重要作用（Chen等人，2024年）。NLRP3炎性小体的激活会触发炎症级联反应，进而促进血小板激活和血栓形成（Potere等人，2023年）。活血祛瘀方中的桃仁、红花和当归具有明显的抗炎和抗血栓效果（Dou等人，2023年；Sun等人，2024年；Wang等人，2020年；Zhao等人，2024年）。基于这些证据，我们假设活血祛瘀方通过NLRP3炎性小体调节炎症反应，从而抑制血小板激活，进而缓解DVT。在本研究中，我们将活血祛瘀方药泥外用于DVT小鼠模型，以探究其抗血栓效果及其基于NLRP3炎性小体驱动的炎症反应的机制。

章节摘录

药泥的制备

活血祛瘀方的配方基于《中医诊疗规范（2021版）》，这是针对DVT的中医临床指南。根据该指南，DVT属于“瘀血”范畴，急性期通常表现为血瘀伴有湿重。其治疗原则是活血化瘀、利尿通络。活血祛瘀方是桃红方的改良版本

活血祛瘀方药泥中的活性成分

HPLC检测结果显示，活血祛瘀方药泥中含有色氨酸（1.52 ng/μL）、绿原酸（2.76 ng/μL）、苦杏仁苷（10.88 ng/μL）和红花黄（3.83 ng/μL），它们的洗脱时间分别为21.211分钟、22.919分钟、23.601分钟和25.167分钟（图1A）。

活血祛瘀方药泥可减轻DVT的形成

为了研究活血祛瘀方药泥对DVT形成的影响，我们通过下腔静脉结扎建立了DVT小鼠模型，并使用活血祛瘀方药泥进行治疗。采集静脉组织并进行苏木精-伊红染色

讨论

活血祛瘀方表现出显著的抗炎和抗血栓效果（Dou等人，2023年；Sun等人，2024年；Wang等人，2020年；Xiao等人，2019年；Zhao等人，2024年）。我们的研究结果显示，活血祛瘀方药泥中含有色氨酸、绿原酸、苦杏仁苷和红花黄。其中，绿原酸已被证明具有保护心血管系统的作用，能抑制血小板激活和血栓形成（Fuentes等人，2014年）

结论

研究表明，活血祛瘀方通过抑制DVT进展中的NLRP3炎性小体驱动的炎症反应，表现出抗炎和抗血栓效果。HPLC检测到的抗血栓成分（绿原酸、苦杏仁苷和红花黄）为这一效果提供了化学依据。本研究证实了活血祛瘀方的疗效，并揭示了NLRP3炎性小体在DVT进展中的潜在治疗靶点

缩写

TCM：中医；DVT：深静脉血栓形成；HXQS：活血祛瘀方；HPLC：高效液相色谱；HE：苏木精-伊红；VTE：静脉血栓栓塞；PE：肺栓塞；UFH：肝素；t-PA：组织型纤溶酶原激活剂；IVC：下腔静脉；APTT：活化部分凝血活酶时间；PT：凝血酶原时间；TT：凝血酶时间；FIB：纤维蛋白原；HRP：辣根过氧化物酶；PRP：富血小板血浆；PPP：贫血小板血浆；BSA：牛血清白蛋白；WB：

伦理批准

所有动物实验均符合ARRIVE指南，并遵循英国《1986年动物（科学程序）法》及相关指南、欧盟指令2010/63/EU关于动物实验的规定，或美国国立卫生研究院关于实验室动物护理和使用的指南（NIH出版物第8023号，1978年修订版）。本研究遵循《巴塞尔宣言》中规定的伦理动物研究原则及相关伦理指南进行

资助

本研究得到了宁波市骨科、运动医学与康复临床研究中心（2024L004）的支持。

CRediT作者贡献声明

陈亚辉：撰写——初稿，数据整理，概念构思。鲍兆丹：可视化，方法学设计。王崇印：软件处理，数据整理。罗琼：撰写——审稿与编辑，概念构思。罗连欣：验证，数据分析。蔡俊杰：验证，数据分析。李艳：可视化，方法学设计。

作者声明没有已知的可能影响本文研究的财务利益或个人关系。