维生素D3与三联疗法协同作用，通过c-Raf/MEK/ERK通路清除小鼠体内的幽门螺杆菌感染

《Tissue and Cell》：Vitamin D3 in synergy with triple therapy to eradicate Helicobacter pylori infection in mice via the c-Raf/MEK/ERK pathway

　　赵帅|单成岩|钟瑶瑶|万代红|辛毅|王文晓
青岛大学烟台玉黄顶医院儿科，山东省烟台市264000

**摘要**
背景
幽门螺杆菌（H. pylori）是胃炎、消化性溃疡和胃癌的主要病原体。目前的根除疗法日益受到抗生素耐药性的影响。维生素D3（VD3）作为辅助治疗显示出潜力，但其作用机制尚不清楚。

**目的**
本研究评估了VD3与三联疗法联合使用对小鼠中H. pylori根除的效果，通过观察病理变化、感染和炎症水平以及上皮细胞死亡情况来探讨其协同作用机制。

**方法**
建立小鼠H. pylori感染模型。四周后，小鼠分别接受VD3治疗、三联疗法、四联疗法（奥美拉唑、阿莫西林、克拉霉素和枸橼酸铋钾）或其组合治疗，持续四周。采用苏木精-伊红（H&E）染色、定量实时PCR、菌落形成、免疫印迹、酶联免疫吸附测定（ELISA）、TUNEL染色和caspase活性测定来评估VD3的效果。

**结果**
与单独使用三联疗法相比，VD3与三联疗法联合使用可减轻胃炎严重程度、降低H. pylori 16S rDNA表达和细菌菌落计数，同时减少炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA和蛋白水平，降低胃上皮细胞凋亡，并抑制caspase-3/6/9活性。VD3处理还增强了胃组织中的c-Raf、MEK和ERK磷酸化。重要的是，ERK抑制剂U0126消除了VD3与三联疗法联合使用的疗效，导致胃炎严重程度增加、H. pylori 16S rDNA表达升高、细菌菌落计数增加和caspase活性增强。

**结论**
维生素D3通过调节c-Raf/MEK/ERK信号通路，发挥抗菌、抗炎和细胞保护作用，与三联疗法协同根除H. pylori感染。

**引言**
幽门螺杆菌（H. pylori）是一种革兰氏阴性细菌，定植于胃黏膜，可引发多种胃肠道疾病，从慢性胃炎和消化性溃疡到胃癌及黏膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤（Malfertheiner等，2023；Tshibangu-Kabamba和Yamaoka，2021）。全球H. pylori感染率约为43.1%，儿童感染率高达32.3%。在中国，估计有5.89亿人感染，感染率为44.2%（Ren等，2022）。这对临床和公共卫生系统构成重大负担（Li等，2023）。H. pylori感染是胃癌最重要的危险因素之一（Duan等，2025；Malfertheiner等，2023），已被世界卫生组织（WHO）列为I类致癌物。其致病性由多种毒力因子介导，包括细胞毒素相关基因A（CagA）、cag致病岛（Cag-PAI）和空泡化细胞毒素A（VacA）（Sedarat和Taylor-Robinson，2024；Yi等，2025）。这些毒力因子引起炎症和上皮损伤，导致上腹痛、腹胀、恶心等症状，在严重情况下可引发溃疡出血或恶性肿瘤（Bhattacharjee等，2024；Ghazanfar等，2024）。因此，根除H. pylori对于防止疾病进展和改善临床结果至关重要。

**材料**
胰蛋白酶大豆琼脂（TSA）购自BD（美国）；苏木精/伊红染色试剂盒购自Solarbio（北京，中国）；奥美拉唑、阿莫西林和克拉霉素购自MedChemExpress（美国）；VD3购自Sigma-Aldrich（美国）；逆转录试剂盒和SYBR qPCR Master Mix染料购自Vazyme（南京，中国）；TRIzol试剂购自Thermo Fisher Scientific（美国）；基因组DNA提取试剂盒购自Promega（美国）。

**结论**
VD3与三联疗法联合使用通过抗菌、抗炎和细胞保护作用，协同根除H. pylori感染。

**讨论**
本研究显示，在H. pylori感染的小鼠模型中，VD3与三联疗法联合使用能有效抑制H. pylori生长，降低炎症细胞因子水平，保护胃上皮细胞免于凋亡，调节caspase家族蛋白表达，从而减轻H. pylori引起的胃损伤。机制研究表明，VD3与三联疗法联合使用通过激活c-Raf/MEK/ERK信号通路发挥疗效。

**伦理声明**
本研究已获得烟台玉黄顶医院伦理委员会的审查和批准（2025–024）。

**作者贡献**
赵帅和单成岩参与研究设计和数据分析，撰写初稿；钟瑶瑶和万代红负责数据解释和验证；王文晓和辛毅监督研究并参与稿件修订。所有作者均对稿件进行最终审阅并同意提交。

**资助**
本研究由资本健康发展研究专项基金（2020–1–2024）支持。