丙型肝炎E筛查灵敏度的价值：德国献血者回溯性调查

《Viruses》：The Value of Hepatitis E Screening Sensitivity: Lookback Investigation in German Blood Donors Ricarda Plümers, Jens Dreier, Attila Mandl, Cornelius Knabbe and Tanja Vollmer

　　

摘要： 研究人员在口腔中经常检测到人类疱疹病毒的存在，然而其在慢性炎性口腔黏膜疾病中的疾病特异性作用仍不明确。这项比较性观察研究调查了口腔扁平苔藓（OLP; n = 35）、阿弗他口炎（AS; n = 31）患者和健康对照者（n = 34）唾液中的EB病毒（EBV）和人类疱疹病毒7（HHV-7）基因组序列以及血清中的病毒特异性抗体。研究人员使用实时PCR对唾液病毒载量进行定量，同时使用基于ELISA的方法测量EBV和HHV-7特异性IgG和IgM抗体。所有组均常见唾液EBV和HHV-7 DNA检测，显示出高基线脱落率和显著的个体间差异。尽管在单变量分析中OLP组的EBV IgG水平高于AS组，但多元回归显示，年龄而非疾病状态是EBV IgG水平的主要决定因素。在校正年龄、性别和不适感后，EBV和HHV-7唾液病毒载量均未显示与OLP或AS的独立关联。HHV-7唾液病毒载量在各组中均匀分布。这些发现表明，唾液EBV和HHV-7的检测反映了普遍的潜伏感染，而非OLP或AS中的疾病特异性活动。需要进行结合免疫学谱分析的纵向和基于组织的研究，以阐明疱疹病毒的再激活是否在特定的患者亚组中促进了疾病的严重程度。

研究背景与问题

口腔扁平苔藓（Oral Lichen Planus, OLP）是一种慢性免疫介导性疾病，具有公认的恶性转化潜能，而复发性阿弗他口炎（Recurrent Aphthous Stomatitis, AS/RAS）是一种常见的口腔黏膜炎性疾病，以多因素病因引起的反复发作的疼痛性溃疡为特征，显著影响患者生活质量。尽管其发病机制被认为是多因素的，但病毒因素，特别是人类疱疹病毒，长期以来被认为是疾病发生、加剧和持续存在的潜在诱因。其中，普遍存在的γ疱疹病毒EB病毒（Epstein-Barr Virus, EBV）和β疱疹病毒人类疱疹病毒7（Human Herpesvirus 7, HHV-7）与这些疾病存在关联，但其具体作用存在争议。一些研究报告了EBV DNA或抗原存在于OLP病变中，提示其可能加剧免疫介导的上皮损伤。HHV-7因其在唾液中的频繁脱落以及与复发性阿弗他溃疡的可能联系，也被推测为病毒触发因素。然而，不同研究的结果并不一致。鉴于疱疹病毒在健康人群中的高流行率，需要设计良好的研究来直接比较临床定义组和健康对照组的唾液病毒载量及病毒特异性抗体水平，以明确其在这些疾病发病机制中的潜在贡献性作用。

为应对这一问题，研究人员开展了这项在拉脱维亚里加斯特拉金什大学牙科研究所口腔医学中心进行的比较性观察研究，旨在通过分析OLP、AS患者和健康对照者的唾液病毒载量和血清病毒特异性抗体水平，确定在调整人口统计学和临床混杂因素后，疱疹病毒活动是否与疾病存在或严重程度相关，从而阐明其在OLP和AS发病机制中的潜在作用。

研究方法概述

研究招募了100名18-75岁的成年参与者，并根据临床诊断分为三组：OLP组（n=35）、AS组（n=31）和健康对照组（n=34）。研究收集了参与者的未刺激全唾液样本和静脉血血清样本。在唾液样本中，研究人员通过实时PCR（qPCR）对EBV和HHV-7的DNA进行了定量分析，分别使用了具有特定线性范围的商用检测试剂盒，结果以每毫升唾液中的拷贝数表示。在血清样本中，研究人员通过化学发光免疫分析法（CLIA）检测了EBV特异性IgG和IgM抗体，并使用基于ELISA的试剂盒分析了HHV-7特异性IgG和IgM抗体。统计数据分析采用描述性统计、非参数检验（如Kruskal-Wallis H检验、Mann-Whitney U检验）、相关分析（Spearman秩相关）以及考虑了年龄、性别、不适感水平、治疗方式和慢性疾病等协变量的多变量回归模型（如广义线性模型和Hurdle模型），以评估研究组与主要结果之间的关联。

研究结果

1. 基线特征与单变量比较

基线特征的单变量比较显示，三组在三个关键领域存在显著差异：年龄、EBV IgG水平和不适感水平。OLP组参与者平均年龄显著高于AS组和对照组。单变量分析中，三组间EBV IgG水平存在显著差异，OLP组中位数水平最高，对照组次之，AS组最低。患者报告的不适感水平在各组间存在高度显著差异，对照组报告“无”不适感，而AS组报告“严重”不适感的比例最高，OLP组则表现出更均衡的严重程度分布。相反，在病毒载量、病毒特异性抗体血清水平以及性别方面，各组间未发现统计学上的显著差异。

2. 相关性分析

最强的相关性出现在年龄和EBV IgG IU/mL之间，呈中度正相关。年龄与HHV-7拷贝数/毫升唾液呈显著弱负相关，与EBV载量拷贝数/毫升唾液呈显著弱正相关。HHV-7特异性抗体原始光密度读数（OD_IgG和OD_IgM）之间存在中度正相关。Spearman秩相关分析揭示了HHV-7特异性OD IgG和OD IgM水平之间存在高度显著的正相关，证实了血清学数据的一致性。相比之下，唾液EBV和HHV-7 DNA载量之间未观察到显著相关性，表明这两种病毒在研究对象中的脱落模式是独立的。关于临床关联，自我报告的不适感水平与唾液病毒载量和EBV特异性IgG水平仅显示出微弱、不显著的相关性。

3. 多变量回归结果

在调整了年龄、性别、不适感水平、治疗和慢性疾病的多变量模型中，诊断组对分析结果的影响具有选择性。诊断组与HHV-7唾液载量、EBV唾液载量、OD_IgG、OD_IgM或EBV IgG水平均无独立关联。相比之下，诊断组是IgM水平的显著独立预测因子，主要由AS组与对照组相比浓度显著升高所驱动。

4. 特定临床亚型的病毒载量比较

在OLP的临床亚型比较中，HHV-7载量在非侵袭性（网状/斑块）临床形式患者中显著高于侵袭性（糜烂/萎缩）形式患者，表明HHV-7感染增加与OLP非侵袭性表现之间存在潜在关联。相比之下，EBV载量显示出相似趋势但未达到统计学显著性。在AS的临床亚型比较中，对于EBV或HHV-7，两种临床形式（轻微型和疱疹型）之间的病毒载量均未观察到统计学上的显著差异。

讨论与总结

本研究发现，唾液中的EBV和HHV-7基因组序列在OLP、AS患者和健康对照者中均被广泛检测到，突显了其高基线流行率和频繁的口腔脱落。尽管在单变量测试中OLP的EBV IgG水平似乎更高，但将这些差异纳入多变量模型后，年龄而非疾病状态成为EBV血清阳性的主要决定因素。这符合年龄依赖性EBV IgG水平升高的既定规律。总的来说，这些结果表明EBV和HHV-7可能在口腔黏膜炎症中起到非特异性的辅助作用，而非作为OLP或AS的主要病因驱动因素。研究的局限性包括唾液采样可能不能完全反映组织水平的潜伏感染、各组间血清和活检样本并非普遍可用，以及横断面设计无法评估病毒活动与疾病发作之间的时间关系。

研究结论翻译如下：

本研究证明，在OLP、AS患者和健康对照者中，唾液EBV和HHV-7 DNA持续可检测，表明存在不依赖于疾病状态的高基线病毒脱落水平。在调整了年龄、性别和临床协变量后，EBV和HHV-7唾液病毒载量均未显示与OLP或AS的独立关联，且HHV-7在所有组中分布均匀。尽管EBV IgG水平最初在OLP中较高，但这种差异归因于年龄相关效应，而非疾病特异性免疫活动。

多变量模型中缺乏显著关联，加上在EBV和HHV-7唾液载量中观察到的较高的个体间差异性，表明这些病毒不能作为可靠的独立生物标志物来区分炎性口腔黏膜疾病与健康状态。唯一确定的疾病相关信号是AS组IgM水平升高，这可能反映了短暂的免疫激活而非直接病毒效应。

总体而言，研究结果支持一个模型，即EBV和HHV-7作为潜在的辅助因子，在特定条件下可能调节疾病过程，其相关性仅限于特定的临床背景，而非反映一致的独立病因作用。未来的研究应纳入纵向采样、病变特异性组织分析和综合免疫学谱分析，以阐明病毒活动是否在特定的患者亚组中促进了疾病动态变化。