《Journal of Inherited Metabolic Disease》：Quantification of Specific Urinary Oligosaccharide Biomarkers for Diagnosis and Treatment Monitoring of Alpha-Mannosidosis
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α-甘露糖苷贮积症（Alpha-mannosidosis, AM, OMIM# 248500）是一种超罕见溶酶体贮积病（Lysosomal Storage Disorder, LSD），由参与N-聚糖寡糖降解的α-甘露糖苷酶活性不足所致。因此，特异性寡糖在组织
α-甘露糖苷贮积症（Alpha-mannosidosis, AM, OMIM# 248500）是一种超罕见溶酶体贮积病（Lysosomal Storage Disorder, LSD），由参与N-聚糖寡糖降解的α-甘露糖苷酶活性不足所致。因此，特异性寡糖在组织内蓄积，导致进行性多器官受累。目前已存在治疗选择，但疗效高度依赖早期确诊。既往开发的尿液寡糖检测方法多为定性或半定量，限制了其在治疗监测中的应用。研究人员开发了一种无需衍生化的快速定量方法，采用超高效液相色谱-串联质谱（Ultra-Performance Liquid Chromatography coupled to Tandem-Mass Spectrometry, UPLC-MS/MS）检测随机尿样中AM生物标志物GlcNAc(Man)2、GlcNAc(Man)3及GlcNAc(Man)4。研究共分析208例对照、20例AM患者及26例其他LSD患者的尿液样本。方法学验证显示回收率高（88%–108%）、精密度佳（标准差<8%）、定量下限低（0.12 μg GlcNAc(Man)2/mL）且样本稳定性好。结果显示对照组与AM患者组间生物标志物浓度差异显著（0.0–9.0 vs 39.4–99.3 μmol GlcNAc(Man)2/mmol肌酐，p<0.0001）。此外，未治疗患者与接受酶替代疗法（Enzyme Replacement Therapy, ERT；n=13，p=0.0006）或造血干细胞移植（Hematopoietic Stem Cell Transplantation, HSCT；n=3，p=0.0143）的患者间GlcNAc(Man)2浓度存在显著差异，且两种治疗方式间的浓度亦存在统计学差异（p=0.0143）。因此，本方法适用于AM的选择性筛查，并为治疗疗效监测提供了简便途径。
本研究发表于《Journal of Inherited Metabolic Disease》，针对超罕见遗传病α-甘露糖苷贮积症（AM）缺乏可靠体液定量标志物的临床痛点展开攻关。AM是由MAN2B1基因变异导致溶酶体α-甘露糖苷酶活性缺陷引发的进行性多器官疾病，现有酶替代疗法（ERT）与造血干细胞移植（HSCT）虽可改善预后，但疗效高度依赖早期干预。当前确诊依赖白细胞或干血斑酶活性检测，该方法受样本储存条件影响大，且难以满足治疗过程中动态监测的需求；既往尿液寡糖检测技术多为定性或半定量，无法精准量化治疗响应，成为制约临床管理的瓶颈。
研究人员构建了包含204例健康对照、20例确诊AM患者（含11例未治疗、10例ERT治疗、3例HSCT治疗）及26例其他溶酶体贮积病（LSD）患者的大规模临床队列，开发并验证了一种基于超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）的尿液寡糖定量检测方法。
在技术方法层面，研究人员建立了无需衍生化的“稀释即进样”样本前处理流程，以GlcNAc(Man)2同位素内标实现准确定量，并以肌酐校正尿液浓度。方法严格遵循ICH M10生物分析方法验证指南，完成线性、准确度、精密度、基质效应及稳定性验证。统计分析采用Whitney-Mann U检验及Holm-Bonferroni多重比较校正，确保结果可靠性。
研究结果部分，方法学验证数据显示三个靶标寡糖回收率达88%–108%，批内精密度标准差小于8%，GlcNAc(Man)2定量下限低至0.12 μg/mL，且室温下可稳定保存2个月，支持临床样本的远距离运输。参考区间分析显示健康人群GlcNAc(Man)2浓度为0.2–4.0 μmol/mmol肌酐，与未治疗AM患者（39.4–99.3 μmol/mmol肌酐）存在10倍以上差距，完全无重叠；GlcNAc(Man)4亦能有效区分两组人群，而GlcNAc(Man)3因存在浓度重叠不作为独立诊断指标。诊断效能评估证实，以GlcNAc(Man)2>10 μmol/mmol肌酐联合GlcNAc(Man)4>5 μmol/mmol肌酐为截断值，结合特征性的寡糖比例模式（GlcNAc(Man)2占比60%–80%），可实现100%灵敏度与特异度，并能有效排除其他LSD的干扰。治疗监测结果显示，未治疗患者、ERT患者与HSCT患者三组间的寡糖浓度呈阶梯式下降，且ERT治疗3个月后生物标志物即显著降低并维持稳态，证明该方法可灵敏反映不同治疗手段的代谢纠正程度。
讨论部分指出，本研究首次实现了尿液AM特异性寡糖的全定量分析，解决了既往方法无法精准监测治疗的难题。相比血浆检测，尿液样本采集无创且前处理简便，更利于临床推广。研究同时揭示了ERT与HSCT在代谢纠正上的差异，为优化个体化治疗方案提供了量化依据。尽管受限于疾病罕见性导致治疗亚组样本量较小，且缺乏2岁以下婴幼儿数据，但现有证据已充分支持该方法的临床应用价值。
结论与展望部分强调，该UPLC-MS/MS方法通量高（每小时10样本）、稳定性强，不仅适用于AM的临床诊断与疗效评估，未来通过适配干血斑样本，有望推动AM纳入新生儿筛查体系，从根本上改善患者预后。
