管塞测试：一种可揭示产后小鼠以子代为中心的防御行为的简易检测方法

《Frontiers in Behavioral Neuroscience》：The tube-plugging test: a simple assay that reveals offspring-centered defensive behavior in postpartum mice

　　

围产期心理健康是重大公共卫生议题。流行病学数据显示，约10–20%的产后女性会出现具有临床意义的抑郁或强迫症状，其中许多症状表现为对子代的过度警觉及保护行为，提示存在以子代为中心的防御过程。野生大鼠等物种中已观察到哺乳期雌性封堵洞穴入口的行为，以减少潜在入侵者进入，但实验室小鼠极少自发表现此类行为，虽偶有类似垫料封堵现象，却缺乏在受控条件下可靠量化的方法。为此，研究人员开发了管塞测试(Tube-Plugging Test, TPT)，该范式通过测量固定于饲养笼管状开口处的垫料积累量，实现对封堵行为的重复、非侵入性量化。研究发现，雄性小鼠极少出现管塞行为，处女雌鼠呈间歇性表现，而产后雌鼠的管塞行为最为显著。个体间管塞水平存在较大差异，但产后雌鼠的日间稳定性高于处女雌鼠。此外，产后雌鼠在接触雄性入侵者后，入侵者进入侧的管塞强度显著增加，表明该行为受直接社会环境调节。上述结果确立了TPT作为一种简便、可重复的管塞行为量化工具，并将管塞行为界定为可测量的以子代为中心的防御组成部分。

该研究针对围产期心理健康这一重大公共卫生问题展开，产后女性抑郁及强迫症状常伴随对子代的过度警觉与保护行为，提示存在以子代为中心的防御机制。野生啮齿类中，哺乳期雌性会封堵洞穴入口以阻挡潜在威胁，但实验室小鼠极少自发表现此类行为，且缺乏标准化定量手段，限制了相关神经机制研究。为填补这一空白，研究人员开发了管塞测试(TPT)，旨在建立一种可在标准饲养条件下重复测量封堵行为的简易范式，从而解析性别、生殖状态及社会威胁对该行为的影响。

研究采用8–24周龄C57BL/6N与ICR小鼠，所有动物购自日本CLEA公司，维持于温度25°C、湿度40–60%、12小时光暗循环环境中，自由摄食饮水。雌性小鼠分为处女组与产后组，产后组于产后0–4天连同幼崽一同转入TPT装置，并在产后3–7天内完成测试。TPT装置由标准小鼠饲养笼与两个改造的50 mL塑料离心管组成，管底切除并以硅胶带包裹，管帽中心开5 mm孔，插入笼壁两侧，管内开口作为垫料封堵位点，每笼提供约85 g垫料。行为测试前24小时将动物单笼安置于TPT笼，随后每24小时移除管帽并称量管内垫料质量，连续测量3天。入侵者实验在基线测试两天后，通过单侧管口引入雄性入侵者并进行短暂接触，次日再次测量管塞量。数据统计采用非参数检验（Kruskal–Wallis、Wilcoxon符号秩检验、Spearman秩相关），显著性水平设为p<0.05。

结果部分显示，性别与生殖状态显著影响管塞行为。雄性小鼠几乎无管塞，处女雌鼠呈中等水平，产后雌鼠管塞量最高（中位数分别为0 g、0.29 g、1.17 g，Kruskal–Wallis p<0.0001）。ICR品系中亦观察到产后雌鼠管塞增强，且与C57BL/6N品系无显著差异。个体间管塞水平差异明显，产后雌鼠的日间相关性更高（Day1与Day2 Spearman ρ=0.87，p<0.0001；Day2与Day3 ρ=0.77，p<0.0001；Day1与Day3 ρ=0.58，p=0.003），而处女雌鼠仅Day1与Day2呈正相关（ρ=0.80，p<0.0001）。

入侵者暴露实验表明，产后雌鼠在入侵者接触的管口管塞量显著增加（Wilcoxon p=0.0043），未暴露侧无变化，总管塞量亦显著上升（p=0.0179）。相关性分析显示，入侵后暴露侧管塞的日间稳定性消失（Day2与Day3 ρ=0.19，p=0.29），而未暴露侧仍保持稳定（ρ=0.65，p=0.0006）。

讨论部分指出，TPT成功量化了小鼠的管塞行为，该行为在产后雌鼠中最为强烈且具有情境依赖性。管塞与筑巢行为在空间功能上不同：筑巢是在子代所在位置构建可利用空间，而管塞则是封闭开口以限制进入，两者互不替代。个体差异可能受社会地位、内部状态及环境不确定性影响，TPT中的管状开口因不可视远端可能引发风险评估反应。研究局限性在于未系统探讨年龄、激素及环境的具体贡献，未来可通过药物干预进一步验证其防御属性。论文发表于《Frontiers in Behavioral Neuroscience》。

综上，研究人员确立TPT为一种简便、可重复的产后小鼠封堵行为量化工具，证实管塞是一种以子代为中心、受生殖状态与社会威胁动态调节的防御行为，为解析母性脑适应机制提供了新的行为学范式。