慢病毒技术通过DNA纤维扩散检测法实现了对特定链的单链DNA（ssDNA）缺失区域的检测

《Communications Biology》：Lentivirus enables the detection of strand-specific ssDNA gaps by the DNA fiber spreading assay

　　

摘要

单分子DNA纤维扩散实验被广泛用于研究DNA复制叉的动态。然而，在DNA扩散过程中，紧密连接的姐妹染色单体会导致领先链和滞后链合并成一根纤维，从而掩盖了那些在生物学和治疗学上越来越重要的链特异性变化。在这里，我们发现了一个意外的结果：在DNA扩散之前对人类细胞系进行慢病毒感染，可以观察到由于Okazaki片段成熟缺陷或PrimPol过度激活而产生的链特异性单链DNA间隙。我们的结果表明，这种效应是暂时的，并且与病毒载体、编码序列或基因组整合无关。从机制上讲，慢病毒会暂时降低新生DNA上的凝聚素水平，这意味着在扩散过程中姐妹染色单体的连接松散，从而允许子链分离。我们提出，慢病毒预处理可以作为一种简单有效的改进方法，使DNA纤维扩散实验能够检测到链特异性的DNA复制变化，并克服其局限性。