基于等温重组酶聚合酶扩增技术，建立鱼类乳球菌病的可视化快速检测方法

《BMC Veterinary Research》：Establishment of methods for visual and rapid detection of piscine lactococcosis based on isothermal recombinase polymerase amplification

　　

摘要

背景

乳球菌病是一种由多种乳球菌（包括 L. garvieae 和 L. petauri）引起的鱼类细菌性疾病，其临床症状常与其他链球菌种类引起的症状重叠。这种诊断上的重叠需要一种快速且精确的诊断工具来指导准确的治疗和控制。为了解决这一诊断难题，我们开发了基于重组酶聚合酶扩增（basic-RPA）和重组酶聚合酶扩增结合侧向流动试纸（RPA-LFD）的检测方法，用于检测与乳球菌病相关的乳球菌种类。

结果

这两种方法对重组质粒 pMD19-adhE-ywdF 的检测限为 10³ 个拷贝/μL，对 L. garvieae 基因组 DNA 的检测限为 10 pg/μL。使用 L. garvieae、Streptococcus agalactiae、Aeromonas hydrophila、Edwardsiella piscicida 和 Streptococcus iniae 的 DNA 进行的特异性测试证实，扩增仅发生在 L. garvieae 上，显示出对所测试菌株的特异性。该检测方法还能检测到 L. petauri，表明其能够识别这两种主要的与乳球菌病相关的乳球菌种类。当使用质粒标准品进行测试时，RPA 方法的灵敏度比 PCR 高 100 倍；而使用基因组 DNA 时，三种方法的检测限相同。将这两种方法应用于 20 份实验感染的罗非鱼样本中，RPA-LFD 的检测结果与传统 PCR 的结果完全一致。

结论

所建立的方法操作简便、灵敏度高且具有特异性，为鱼类乳球菌病的快速现场诊断提供了一种有前景的检测工具。