携带新型复合杂合NBAS（neuroblastoma amplified sequence）变异伴噬血细胞性淋巴组织细胞增生症（HLH）及多系统受累的病例报告：扩展临床表型谱及文献复习

《Frontiers in Immunology》：A novel compound heterozygous NBAS variant with HLH and multisystem involvement: expanding the clinical spectrum and literature review

　　

摘要：神经母细胞瘤扩增序列（neuroblastoma amplified sequence, NBAS）基因的双等位基因变异与短身材、视神经萎缩和Pelger-Hu?t异常（short stature, optic atrophy, and Pelger-Hu?t anomaly, SOPH）综合征、婴儿肝衰竭综合征2型（infantile liver failure syndrome type 2, ILFS-2）及日益广泛的临床表型相关。然而，伴有噬血细胞性淋巴组织细胞增生症（hemophagocytic lymphohistiocytosis, HLH）、免疫功能紊乱及多系统受累的病例尚未见报道。研究人员在一例中国女孩中鉴定出NBAS基因新型复合杂合变异c.5139-5T>G和c.5983C>T（p.Arg1995Ter），患儿先后出现反复感染、矮小症、ILFS-2、由白细胞减少进展为二系减少最终全血细胞减少，以及HLH。聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）证实c.5139-5T>G变异导致异常剪接；c.5983C>T为新型变异，依据美国医学遗传学与基因组学学会（American College of Medical Genetics and Genomics, ACMG）指南判定为疑似致病性（likely pathogenic）。患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）的蛋白质免疫印迹（Western blotting）仅检测到截短NBAS蛋白，与c.5983C>T变异预测产物一致。在过表达截短NBAS蛋白的HEK293T细胞中进行功能研究，通过实时荧光定量逆转录PCR（real-time quantitative reverse transcription PCR, RT-qPCR）及免疫荧光分析评估，提示NBAS功能受损。研究人员系统复习了既往报道的322例患者，并对其中316例进行基因型-表型关联分析以进一步明确NBAS相关疾病临床谱。本研究鉴定了新型致病变异，扩展了NBAS相关疾病的表型谱，并为基因型-表型关联提供了新见解。全血细胞减少和HLH可能反映严重免疫失调及不良预后，强调早期识别和及时干预的重要性。

本文对发表于《Frontiers in Immunology》的论文《A novel compound heterozygous NBAS variant with HLH and multisystem involvement: expanding the clinical spectrum and literature review》进行解读。

研究背景：神经母细胞瘤扩增序列（neuroblastoma amplified sequence, NBAS）基因编码参与无义介导mRNA衰变（nonsense-mediated decay, NMD）及高尔基体-内质网（Golgi-to-endoplasmic reticulum, ER）逆向转运的蛋白。NBAS双等位基因变异可致常染色体隐性遗传病，典型表型包括短身材、视神经萎缩和Pelger-Hu?t异常（short stature, optic atrophy, and Pelger–Hu?t anomaly, SOPH综合征）及婴儿肝衰竭综合征2型（infantile liver failure syndrome type 2, ILFS-2），亦可伴免疫缺陷（如中性粒细胞减少）。然而，NBAS缺陷并发噬血细胞性淋巴组织细胞增生症（hemophagocytic lymphohistiocytosis, HLH）伴严重多系统受累鲜有报道，且缺乏基因型-表型系统性分析。为此，研究人员报告一例携带新型复合杂合NBAS变异、表现为反复感染、生长迟缓、ILFS-2、进行性血细胞减少及致死性HLH的中国女孩，并结合文献复习316例已报道患者，旨在明确NBAS缺陷的严重炎症并发症及基因型-表型相关性。

主要关键技术方法：研究人员收集先证者及父母外周血样本行全外显子测序（whole-exome sequencing, WES）及Sanger测序验证；按ACMG指南进行变异致病性评级及生物信息学预测；提取先证者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）行蛋白质免疫印迹（Western blotting）检测NBAS蛋白；取先证者母亲cDNA行RT-PCR及Sanger测序验证剪接异常；构建野生型及c.5983C>T突变型NBAS表达质粒转染HEK293T细胞，通过RT-qPCR检测NBAS mRNA水平，免疫荧光观察NBAS与ER标记（calreticulin/CALR）及高尔基标记（GM130）的共定位并以Manders重叠系数量化；系统检索PubMed及Google Scholar收录的NBAS相关病例（截至2025年10月），剔除基因型或表型不全者后纳入316例按Staufner等提出的结构域分组（β-propeller、Sec39、C-terminal及Others组）进行基因型-表型关联分析；统计学分析采用Student t检验。

研究结果：

Case presentation（病例表现）：先证者为非近亲婚配中国女孩，足月小样儿（出生体重2.2 kg）。约1岁起反复上呼吸道感染及扁桃体炎，4岁起生长迟缓，5岁5个月因发热、白细胞减少首次入院。5岁8个月起反复转氨酶升高伴或不伴发热，发作间期不恢复至正常，发生两次急性肝衰竭（acute liver failure, ALF）符合ILFS-2。6岁1个月出现重度贫血（Hb 32 g/L），骨髓示红系显著减低。6岁8个月持续发热，满足HLH-2004五项诊断标准（发热、脾大、三系血细胞减少、血清铁蛋白615 μg/L、骨髓见噬血细胞），腹部超声示肝肿大。体检身高99 cm（< />⁺T细胞减少，CD4⁺/CD8⁺比值降低，CD19⁺B细胞比例升高，免疫球蛋白正常。HLH诊断后细胞因子谱示TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-12p70、IL-10反复升高。先后予地塞米松+鲁索利替尼（ruxolitinib）、后续换用emapalumab联合地塞米松，初有好转，后因感染复发、病情恶化，最终死于难治性HLH及ALF。

Identification of NBAS mutations in the patient（NBAS变异鉴定）：WES检出复合杂合变异c.5139-5T>G（母源，剪接位点）和c.5983C>T（父源，p.Arg1995Ter）。c.5983C>T为未报道新变异，gnomAD等人群数据库频率为0，Arg1995跨物种高度保守，ACMG评为疑似致病（PM2+PM3+PM4+PP3+PP4）。Sanger测序确认双亲各携带其一。

Functional studies of the identified NBAS variants（NBAS变异功能研究）：含三个子部分——①NBAS protein expression in PBMCs：患者PBMCs Western blot仅见截短NBAS蛋白条带（约220 kDa），对应c.5983C>T无义变异产物。②Splicing effect of the c.5139-5T>G variant：先证者母亲cDNA PCR产物较对照多出短片段，Sanger示c.5139后出现双峰，测序证实c.5139-5T>G致NBAS pre-mRNA异常剪接、外显子42（251 bp）缺失，为功能丧失性变异，且患者来源该等位转录本经NMD降解故Western blot未见相应条带。③The c.5983C>T variant reduces NBAS mRNA expression：转染HEK293T细胞后，突变型载体eGFP荧光弱于野生型；RT-qPCR显示突变组NBAS及eGFP mRNA水平显著低于野生型组（P<0.0001），提示无义介导mRNA衰变致表达下降。④The c.5983C>T variant impairs Golgi-to-ER retrograde trafficking：免疫荧光示突变型NBAS与ER标记共定位程度显著高于野生型，与高尔基标记共定位显著降低（P<0.01及P<0.001），表明C端截短破坏NBAS正常亚细胞定位及高尔基-ER逆向转运功能。

Literature review — Genotype–phenotype comparison（文献复习-基因型表型比较）：纳入分析316例报道患者。Sec39域变异组（n=82）以肝病为主（ALF 93.8%），C端域变异组（n=148）呈典型SOPH样多系统表型（矮小、PHA、视神经萎缩，ALF仅28.6%），β-propeller域变异组（n=28）混合表型（ALF 85.7%）无血液学异常，Others组（n=58）混合肝与多系统受累且血液学异常常见。本例变异分别位于内含子（影响剪接）及C端域，归类Others组，具肝衰竭+多系统免疫血液学异常特征。

Literature review — Comparison with previously reported NBAS-deficient patients with HLH（与已报道NBAS缺陷合并HLH患者比较）：此前报道7例NBAS-HLH患者多表现为HLH±肝损伤，本例除致命性HLH外还有生长迟缓、免疫缺陷、ILFS-2及进行性全血细胞减少，表型更广泛严重；已报道HLH病例变异多位于C端域或β-propeller与Sec39间区，提示C端域及Others分类患者可能更易并发HLH。

讨论与结论（翻译浓缩）：NBAS最初作为SOPH综合征致病基因被报道，目前已认识其表型具高度异质性。本文先证者具小于胎龄、反复感染、生长迟缓、白细胞减少、ALF、进展为