ProBDNF通过Notch1信号通路促进LPS诱导的肺泡巨噬细胞的促炎极化

《Immunologic Research》：ProBDNF promotes LPS-induced pro-inflammatory polarization of alveolar macrophages via the Notch1 signaling pathway

　　

摘要

巨噬细胞的极化参与了急性呼吸窘迫综合征（ARDS）的发病机制。然而，在病理条件下影响巨噬细胞炎症表型的上游调控因子仍不明确。最近发现，脑源性神经营养因子（proBDNF）与免疫调节有关，但其在巨噬细胞极化中的作用及其潜在机制仍不清楚。本研究使用脂多糖（LPS）刺激NR8383肺泡巨噬细胞来模拟体外炎症反应。通过腺病毒过表达或敲低技术调控proBDNF的表达。通过RT-qPCR检测与极化相关的基因表达，通过ELISA评估细胞因子分泌情况，并通过Western blotting和免疫荧光技术检测蛋白质水平。还通过RT-qPCR检测神经营养因子受体（包括Ngfr/p75NTR和Ntrk2/TrkB）的表达。通过检测NICD水平及其下游靶基因Hes1和Hes5的表达来评估Notch1通路的激活情况。为了进一步研究该通路的参与程度，进行了NICD敲低实验。LPS刺激显著增加了NR8383细胞中的proBDNF表达。proBDNF的过表达促进了向促炎（M1）表型的转变，表现为Cxcl9和Nos2的表达增加，而M2标志物（Arg1和Mrc1）的表达减少。相反，proBDNF的敲低产生了相反的效果。proBDNF的过表达增加了TNF-α的分泌并减少了IL-10的产生，而proBDNF的敲低则产生了相反的趋势。NR8383细胞表达了Ngfr/p75NTR和Ntrk2/TrkB，其中Ngfr表现出更强的炎症反应性。这些变化伴随着Notch1信号活性的相应改变，这体现在NICD、Hes1和Hes5表达的变化上。重要的是，沉默NICD显著减弱了proBDNF过表达诱导的促炎极化。相比之下，抑制Notch1信号传导并未影响proBDNF的表达，这支持了Notch1在此模型中位于proBDNF下游的功能。proBDNF通过Notch1通路激活等机制促进巨噬细胞向促炎表型的极化。这些发现揭示了巨噬细胞驱动的炎症中的proBDNF–Notch1调控轴，并为炎症性肺损伤的神经免疫机制提供了新的见解。