《Journal of Molecular Histology》：Araticum (Annona crassiflora) seed extract as a chemopreventive agent against prostate cancer: activation of extrinsic and intrinsic apoptotic pathways in a preclinical model
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前列腺癌(Prostate Cancer, PCa)是老年男性中最常诊断的恶性肿瘤之一，仍是重大公共卫生问题，亟需有效且安全的预防策略。研究人员采用转基因前列腺癌小鼠(Transgenic Adenocarcinoma of the Mouse Prostat
前列腺癌(Prostate Cancer, PCa)是老年男性中最常诊断的恶性肿瘤之一，仍是重大公共卫生问题，亟需有效且安全的预防策略。研究人员采用转基因前列腺癌小鼠(Transgenic Adenocarcinoma of the Mouse Prostate, TRAMP)模型评估Annona crassiflora Mart.种子提取物(Araticum Seed Extract, ASE)的作用。动物分为对照组与ASE处理组，评估期分别为8–12周龄至12–16周龄。对照组给予溶媒(含10% DMSO的水)，ASE组按100 mg/kg体重灌胃给予ASE。肝脏组织学结构保存完好及正常体重增长表明ASE耐受良好，未显示肝毒性。ASE处理在早期前列腺病变(主要为低级别前列腺上皮内瘤变Low-Grade Prostatic Intraepithelial Neoplasia, LGPIN)和晚期前列腺病变(高级别前列腺上皮内瘤变High-Grade Prostatic Intraepithelial Neoplasia, HGPIN及高分化腺癌Well-Differentiated Adenocarcinoma, WDAC)中均增加了健康前列腺上皮的频率。此外，ASE 12–16周组降低了HGPIN发生率及WDAC发生率。ASE还降低了晚期前列腺病变(HGPIN和WDAC)中雄激素受体(Androgen Receptor, AR)蛋白水平及其胞质与核定位。ASE通过多条通路诱导凋亡，包括上调BID、BAD和BAX，激活caspase-8、caspase-9和caspase-3，以及下调BCL-2、BCL-xL和MCL-1。因此ASE促成了不利于肿瘤存活的促凋亡微环境。综上所述，结果强化了ASE调节前列腺稳态的潜力，提示其作为PCa化学预防剂及辅助治疗的可行性。
论文解读：Araticum (Annona crassiflora)种子提取物对TRAMP小鼠前列腺癌进展的化学预防作用及凋亡机制研究
研究背景与意义
前列腺癌(Prostate Cancer, PCa)是老年男性高发恶性肿瘤，疾病进展与雄激素受体(Androgen Receptor, AR)信号异常及凋亡抑制密切相关。目前缺乏低毒有效的化学预防策略，天然产物因多靶点活性和较低毒性受到关注。Araticum(Annona crassiflora Mart.，巴西Cerrado生物群系原生果树)的种子富含多酚和乙酰精宁(acetogenins)，前期细胞实验提示其抑制前列腺癌细胞增殖并诱导凋亡，但体内化学预防效应及机制尚不清楚。该研究首次在TRAMP(Transgenic Adenocarcinoma of the Mouse Prostate)小鼠模型中评价Araticum种子提取物(Araticum Seed Extract, ASE)对前列腺癌变进程的延缓作用及对外源性与内源性凋亡通路的调控，为植物源提取物作为PCa化学预防剂提供依据。论文发表于《Journal of Molecular Histology》。
主要关键技术方法
研究人员采用TRAMP小鼠(C57BL/6-Tg(TRAMP)8247Ng/J × FVB/NJ F1/J)，设对照组(10% DMSO水溶液)与ASE组(100 mg/kg体重，溶于10% DMSO，每周5天灌胃，持续4周)，分8–12周龄早期干预组和12–16周龄晚期干预组(n=15/组)。处死后取背外侧前列腺(dorsolateral prostate lobe)进行石蜡包埋切片H&E染色，按健康上皮、LGPIN(Low-Grade Prostatic Intraepithelial Neoplasia)、HGPIN(High-Grade Prostatic Intraepithelial Neoplasia)、WDAC(Well-Differentiated Adenocarcinoma)四级评分统计病变频率；采用免疫组织化学(IHC)检测caspase-3、BID、Bcl-xL、PCNA(Proliferating Cell Nuclear Antigen)、AR的表达与亚细胞定位并半定量评分；采用Western blotting检测凋亡相关蛋白(BAX、BAD、BID、BCL-2、BCL-xL、MCL-1、caspase-8、caspase-9、procaspase-3、caspase-3、AR)及增殖标志物PCNA的蛋白水平(β-actin内参)；监测体重与肝组织学评估全身毒性；数据经Shapiro–Wilk检验正态性后行单因素ANOVA及Tukey事后检验(p<0.05为差异显著)。
研究结果
Evaluation of treatment tolerability and safety
ASE(100 mg/kg)或溶媒隔日灌胃4周未引起体重异常改变，各组体重渐进增长相当；肝组织HE染色未见肝细胞结构破坏或炎性浸润，证实ASE在本实验条件下无肉眼及组织学可辨肝毒性，全身耐受良好。
ASE exerted chemopreventive effects and attenuated malignant lesions and cell proliferation
组织学量化显示：ASE处理组各年龄段健康前列腺上皮频率升高；8–12周龄ASE组LGPIN与HGPIN比例降低，WDAC无统计学差异；12–16周龄ASE组HGPIN发生率下降，WDAC由对照组的8.7%±1.14降至3.53%±0.55。IHC示ASE降低PCNA阳性细胞比例，Western blotting仅在12–16周龄组检测到PCNA总蛋白下调，提示ASE抑制前列腺上皮细胞增殖并延缓PIN向腺癌进展。
ASE reduces AR expression and influences its cytoplasmic retention in early prostate lesions (predominantly LGPIN)
IHC显示ASE降低晚期病变(HGPIN和WDAC)中AR胞质与胞核免疫标记强度；8–12周龄ASE组胞核AR标记低于胞质，提示AR核转位受抑，但总AR蛋白Western blotting在该期无显著差异；12–16周龄ASE组总AR蛋白及胞质/胞核AR均减少，表明ASE在进展期显著抑制AR信号通路。
ASE induced apoptosis through activation of the intrinsic and extrinsic pathways during PCa progression characterized by HGPIN and WDAC lesions
ASE上调促凋亡蛋白BAX、BAD(两个年龄段)及BID(仅12–16周龄)；增加procaspase-9、活化caspase-9及procaspase-3(两个年龄段)，caspase-3活化蛋白仅在12–16周龄ASE组升高；caspase-8蛋白水平在12–16周龄ASE组升高，8–12周龄无变化。抗凋亡蛋白BCL-2、MCL-1(两个年龄段)及BCL-xL(两个年龄段)蛋白水平与IHC强度均被ASE下调。综上，ASE在晚期病变通过上调BID连接外源(caspase-8)与内源(BAX/BAK–mitochondrial途径–caspase-9)凋亡通路，并抑制抗凋亡Bcl-2家族成员，形成促凋亡平衡。
讨论与结论总结
讨论指出ASE含没食子酸(gallic acid)、儿茶素(catechin)、槲皮素(quercetin)、芦丁(rutin)及乙酰精宁，其多酚组分可通过表观/转录后调控影响PCa进程；ASE在TRAMP小鼠背外侧叶增加健康上皮比例、降低HGPIN与WDAC发生率，伴随PCNA下调及AR信号抑制(早期胞质滞留、晚期总量降低)。凋亡机制上ASE协同激活死亡受体途径(caspase-8↑，12–16周)与线粒体途径(BAX/BAD↑、BCL-2/BCL-xL/MCL-1↓、caspase-9/-3活化)，BID上调桥接两通路。研究局限性含单剂量设计、未设阳性药物对照及TRAMP模型本身偏神经内分泌表型。结论为：ASE在TRAMP小鼠中耐受良好、无肝毒性，通过抑制细胞增殖、下调AR信号及协同激活外源/内源凋亡通路维持前列腺上皮稳态、延缓癌前病变进展，具PCa化学预防及辅助治疗潜力。
