《Journal of Molecular Histology》：The pro-apoptotic GZMB and anti-apoptotic HAX-1 and DAD-1 genes and gene proteins in human right auricular tissue affected by coronary heart disease and aortic valve stenosis: a pilot study
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抗凋亡基因DAD-1(defender against cell death 1)与HAX-1(HS1 binding protein 1)及促凋亡基因GZMB(granzyme B)在心脏组织凋亡调控中具有重要作用，但其基因及蛋白在心血管疾病发病机制中的研究
抗凋亡基因DAD-1(defender against cell death 1)与HAX-1(HS1 binding protein 1)及促凋亡基因GZMB(granzyme B)在心脏组织凋亡调控中具有重要作用，但其基因及蛋白在心血管疾病发病机制中的研究仍有限。本研究旨在明确冠状动脉性心脏病(CHD)及主动脉瓣狭窄(AoS)受累右心耳组织中促凋亡与抗凋亡基因及其蛋白的存在与分布特征，并与对照组比较。研究获取15例择期开胸手术CHD合并AoS患者右心耳组织，对照组为5例历史解剖档案中儿科个体标本。组织行H&E常规染色；HAX-1与GZMB蛋白经免疫组织化学(IHC)检测，HAX-1、GZMB及DAD-1基因经色原原位杂交(CISH)检测。结果采用半定量评估，Mann–Whitney U检验及Spearman等级相关系数分析。患者心肌细胞HAX-1与GZMB蛋白呈中等阳性，对照组呈大量至丰富阳性；DAD-1基因在两组间表达相当，HAX-1与GZMB阳性细胞在对照组占优势；仅HAX-1基因阳性心肌细胞在患者与对照组间差异有统计学意义，且HAX-1基因与其对应蛋白呈正相关。患者组织中HAX-1基因表达下调及GZMB基因表达降低趋势可能部分反映CHD与AoS中GZMB与HAX-1相关凋亡表达模式的平衡偏移，年龄及疾病差异亦可能产生贡献。CISH与IHC联用可对观察结果提供互补评估。DAD-1基因在CHD/AoS心肌细胞与对照间无差异表达，提示该基因在此类疾病中作用较不明显或具变异性。
研究背景与目的
冠状动脉性心脏病（coronary heart disease, CHD）与主动脉瓣狭窄（aortic valve stenosis, AoS）可导致心肌细胞丢失与心功能受损。抗凋亡基因DAD-1（defender against cell death 1）、HAX-1（HS1 binding protein 1）及促凋亡基因GZMB（granzyme B）参与心脏组织凋亡调控，但其在CHD及AoS右心耳（right atrial appendage）组织中的表达定位及相关性尚不清楚。为此，研究人员采集CHD/AoS患者及儿科对照的右心耳组织，通过色原原位杂交（chromogenic in situ hybridization, CISH）与免疫组织化学（immunohistochemistry, IHC）检测上述基因及HAX-1、GZMB蛋白的分布与表达水平，探讨其与凋亡的相关性。该初步研究发表于Journal of Molecular Histology。
主要技术方法
研究人员收集15例52–83岁择期开胸手术的CHD和/或AoS患者右心耳标本，对照组为5例无获得性心脏病儿科个体的历史解剖存档右心耳标本。组织经固定、石蜡包埋、切片后行苏木精–伊红（hematoxylin and eosin, H&E）常规染色及TUNEL（terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling）凋亡检测；HAX-1、GZMB及DAD-1基因表达采用CISH检测，HAX-1与GZMB蛋白采用IHC（链霉亲和素–生物素法，LSAB）检测；结果由两名形态学专家独立半定量评分，应用Mann–Whitney U检验比较组间差异，Spearman等级相关分析基因–蛋白相关性。
研究结果
Routine staining（常规染色）
H&E染色示对照组右心耳组织形态保存良好；患者组可见纤维化、局灶炎细胞浸润、心肌细胞空泡变性、核固缩及脂肪组织沉积。
TUNEL staining（TUNEL染色）
患者组凋亡心肌细胞中位数评分为3.00（IQR 3.00–4.00，中等至丰富），对照组为1.00（IQR 1.00–1.50，少量），患者组TUNEL阳性细胞显著多于对照组（p＜0.001），证实CHD/AoS右心耳组织凋亡活动增强。
Tissue in situ hybridization data (CISH)（组织CISH数据）
DAD-1基因在两组间表达无统计学差异（p＝1.000）。HAX-1基因在对照组偶见至少量阳性（中位数0.50），患者组几乎无至少量（中位数0.25），对照组显著高于患者组（p＝0.025）。GZMB基因在对照组略高于患者组但无统计学意义（p＝0.230）。结论：仅HAX-1基因mRNA在CHD/AoS右心耳心肌细胞中显著下调，DAD-1基因表达不受此疾病状态影响，GZMB基因呈下调趋势。
Immunohistochemical (IHC) data（免疫组化数据）
HAX-1蛋白患者组中位数为2.00（中等阳性），对照组为4.00（丰富阳性），差异显著（p＝0.002）。GZMB蛋白患者组中为2.00（中等阳性），对照组为4.00（丰富阳性），差异显著（p＝0.002）。结论：CHD/AoS患者右心耳心肌细胞中抗凋亡HAX-1蛋白与促凋亡GZMB蛋白均较对照组显著降低。
Spearman's correlation coefficient（Spearman相关系数）
HAX-1基因与HAX-1蛋白呈中度正相关（r＝0.504, p＝0.023）；HAX-1基因与GZMB蛋白呈中度正相关（r＝0.522, p＝0.018）；HAX-1蛋白与GZMB蛋白呈强正相关（r＝0.752, p＜0.001）。GZMB基因与蛋白无显著相关。结论：HAX-1转录与翻译水平在本研究中具一致性关联，HAX-1与GZMB蛋白表达共存于心肌细胞。
讨论与结论翻译
讨论指出DAD-1基因在CHD/AoS右心耳组织与对照间无差异，提示其在本研究条件下作用有限或具变异性，与既往外周血研究结果不同可能源于组织类型差异。HAX-1基因及蛋白在患者中下调，且与蛋白水平正相关，支持HAX-1的抗凋亡保护功能可能在CHD/AoS右心耳组织中被削弱；一例患者血管成纤维细胞HAX-1基因高表达提示其在纤维化中或有潜在作用。GZMB基因及蛋白在患者中未升高反而低于发育期对照，可能与样本年龄、疾病背景及组织局部调控有关，未检测到GZMB基因–蛋白相关性，提示存在转录后调控影响。尽管促、抗凋亡因子均下降，TUNEL证实凋亡仍活跃，提示凋亡通路失衡而非全面抑制。研究受限于小样本、非年龄匹配儿科对照及仅取右心耳部位。
结论部分原文翻译：HAX-1表达降低伴GZMB表达降低趋势可反映促/抗凋亡表达模式的差异，伴轻微向凋亡增强偏移。然而HAX-1基因显著下调及其与对应蛋白的相关性提示该抗凋亡基因在所受试CHD/AoS患者右心耳组织中可能具重要潜在作用。这些发现虽可反映凋亡通路表达变异，但研究组与对照组间年龄及疾病机制差异亦可能影响观察模式。本结果属初步试点研究内的观察性关联，需在更大样本研究中验证。
