《Pharmaceuticals》：Ameliorative Effect of Erjing Pills on Retinal Damage in Rats with Diabetic Retinopathy
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背景：糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病的主要并发症之一。二精丸（EJPs）在中医理论中被认为具有补益精血、明目的作用，但其对DR的具体效果尚不清楚。该研究旨在探讨EJPs对DR的治疗效果及其潜在机制。方法：采用超高效液相色谱-质谱联用（UHPLC-MS）表征E
背景：糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病的主要并发症之一。二精丸（EJPs）在中医理论中被认为具有补益精血、明目的作用，但其对DR的具体效果尚不清楚。该研究旨在探讨EJPs对DR的治疗效果及其潜在机制。方法：采用超高效液相色谱-质谱联用（UHPLC-MS）表征EJPs的化学成分谱。通过网络药理学和分子对接预测其活性成分和潜在靶点。通过链脲佐菌素诱导DR大鼠模型。采用光学相干断层扫描（OCT）、荧光素眼底血管造影（FFA）和H&E染色评估视网膜形态和功能。通过蛋白质印迹法（Western blot）、定量实时聚合酶链反应（qPCR）和酶联免疫吸附测定（ELISA）检测与AGE-RAGE通路、氧化应激、炎症和紧密连接相关的蛋白质和mRNA表达。结果：液相色谱-质谱联用（LC-MS）和网络药理学分析确定了EJPs与DR之间的638个共同靶点，核心靶点包括SRC、AKT1和MAPK1，主要富集在AGE-RAGE信号通路中。分子对接证实关键EJP成分与核心靶点之间具有强结合力（结合能糖尿病视网膜病变（DR）是糖尿病的主要并发症之一，也是患者视力损害和失明的主要原因。近年来研究揭示DR不仅是微血管疾病，更是一种高度组织特异性的神经血管并发症，其早期事件包括视网膜神经退行性变（DRN）和神经血管单元（NVU）功能损伤。黄精（Polygonatum sibiricum）和枸杞（Lycium barbarum L.）组成的经典药对“二精丸（EJPs）”，在中医中被用于缓解视物模糊、耳鸣、头晕、多饮、腰膝酸软等症状。现代药理研究显示两味药具有降血糖、抗氧化、抗炎、抗衰老和神经保护作用，但EJPs对DR的具体作用机制尚不清楚。前期体外研究提示EJPs可降低视网膜色素上皮（RPE）细胞中活性氧（ROS）、血管内皮生长因子（VEGF）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）等DR相关致病因子。基于此，研究人员开展本研究，旨在通过网络药理学和动物实验探讨EJPs防治DR的机制。
研究人员通过超高效液相色谱-质谱联用（UHPLC-MS）表征EJPs的化学成分；利用SwissADME、Swiss Target Prediction、GeneCards和OMIM数据库进行网络药理学分析，预测活性成分和靶点；采用AutoDock Vina进行分子对接验证结合力。体内实验使用雄性SPF级Brown Norway（BN）大鼠（6周龄，150±20g，购自北京SPF Biotechnology Co., Ltd.），以链脲佐菌素（STZ）诱导DR模型，分为正常组（CON）、模型组（MOD）、阳性药钙多贝西组（CDC，135 mg/kg）、低剂量EJP组（EJPL，1.5 g/kg）和高剂量EJP组（EJPH，6 g/kg），口服灌胃10周。采用光学相干断层扫描（OCT）、荧光素眼底血管造影（FFA）、H&E染色、伊文思蓝（EB）渗漏检测和透射电子显微镜（TEM）评估视网膜结构和功能；通过Western blot、qPCR、ELISA检测AGE-RAGE通路、氧化应激、炎症和紧密连接相关蛋白及mRNA表达。
2.1 EJPs的化学成分（Chemical Composition of EJPs）：通过UHPLC-MS在正负离子模式下鉴定出EJPs中408种成分，主要类别包括有机酸（26.9%）、醇类（17.4%）、醛酮类（4.2%）等。
2.2 EJPs治疗DR的网络药理学分析（Network Pharmacology Analysis of EJPs in DR）：筛选出66种主要活性成分，对应1017个靶点；DR相关靶点6303个，两者交集638个共同靶点。蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络分析显示核心靶点为SRC、AKT1、PIK3CA、HSP90AA1、MAPK1等。
2.3 GO功能分析与KEGG富集分析结果（Results of GO Functional Analysis and KEGG Enrichment Analysis）：GO分析表明生物过程主要涉及对外源刺激反应和MAPK级联调控，分子功能包括蛋白酪氨酸激酶活性等；KEGG富集通路中AGE-RAGE信号通路和MAPK信号通路最为显著。
2.4 分子对接结果（Result of Molecular Docking）：关键EJP成分（如Paprazine、5-羟基吲哚乙酸等）与核心靶点（AKT1、HSP90AA1、PIK3CA、MAPK1、SRC）的结合能均低于?5.0 kcal/mol，提示强结合能力。
2.5 EJPs可能改善糖尿病大鼠视网膜损伤（EJPs Might Ameliorative Retinal Damage in Diabetic Rats）：与MOD组相比，EJPH组动物体重无显著差异，血糖未改善，但FFA显示荧光素钠渗漏点减少，OCT显示视网膜厚度有恢复趋势（无统计学差异）。
2.6 EJPs对糖尿病视网膜病变大鼠组织病理学及相关蛋白表达的影响（The Effects of EJPs on Histopathology and the Expression of Related Proteins in Rats with Diabetic Retinopathy）：H&E染色显示EJPs改善视网膜各层结构紊乱和空泡化，EJPH显著恢复视网膜厚度。EB渗漏实验证实EJPH降低血管通透性。TEM观察到EJP治疗组视网膜神经节细胞（RGCs）超微结构改善。Western blot显示EJP治疗显著上调紧密连接蛋白ZO-1、occludin和claudin-5的表达。
2.7 EJPs对糖尿病视网膜病变大鼠AGE-RAGE和氧化应激的影响（The Effects of EJPs on AGE-RAGE and Oxidative Stress in Rats with Diabetic Retinopathy）：Western blot显示EJPs显著下调RAGE和NF-κB蛋白水平；qPCR显示EJPH显著降低RAGE mRNA表达，升高Nrf2和HO-1 mRNA表达。免疫荧光显示EJP治疗组视网膜中AGEs荧光强度降低。
2.8 EJPs调节VEGF、IL-6、TNF-α、IL-1β、MDA、GSH、CAT和SOD表达改善视网膜损伤（EJPs Regulate the Expression of VEGF, IL-6, TNF-α, IL-1β, MDA, GSH, CAT, and SOD to Improve Retinal Damage）：ELISA结果显示EJP剂量依赖性抑制血清VEGF升高，降低促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平，同时升高抗氧化酶SOD、CAT、GSH活性，降低脂质过氧化产物MDA水平。
讨论部分指出，EJPs通过多靶点协调调节AGE-RAGE-NF-κB/Nrf2轴，减轻氧化应激、炎症和血管渗漏，从而保护血-视网膜屏障。研究局限性包括网络药理学预测的其他靶点（如AKT1、MAPK1、SRC）尚未得到功能验证，以及活性成分需进一步鉴定。未来方向包括功能解析关键靶点和表征活性成分。研究结论翻译如下：总之，研究人员通过多个方面验证了EJPs在改善糖尿病视网膜损伤中的作用。EJPs通过减少血管渗漏、保护视网膜结构、增加RGCs数量、增强紧密连接蛋白表达和降低VEGF水平等多种机制改善视网膜损伤。这些发现为EJPs作为糖尿病视网膜病变的治疗策略提供了坚实的科学依据。未来研究将进一步揭示更深层的作用机制，为临床应用提供更坚实的科学基础。
