阳和汤(Yang He Decoction, YHD)对环磷酰胺(Cyclophosphamide, CTX)诱导的小鼠免疫抑制的免疫调节作用：恢复免疫器官完整性及细胞因子平衡

《Frontiers in Pharmacology》：Immunomodulatory effects of Yang He decoction on cyclophosphamide-induced immunosuppression in mice: restoration of immune organ integrity and cytokine balance

　　

目的(Objective)：评价经典中药复方阳和汤(Yang He Decoction, YHD)对环磷酰胺(Cyclophosphamide, CTX)诱导的小鼠免疫抑制的保护作用及潜在机制。方法(Methods)：采用腹腔注射CTX(80 mg/kg)建立昆明(Kunming)小鼠免疫抑制模型，给予低、中、高剂量YHD(50、100、200 mg/kg)或阳性对照药黄芪多糖(Astragalus Polysaccharide, APS, 24 mg/kg)连续灌胃15 d。系统评估体重变化、免疫器官(脾和胸腺)指数及组织病理学、脾淋巴细胞增殖及细胞周期分布、血清细胞因子(IL-1β、IFN-γ、TNF-α、IL-6及IL-10)水平。结果(Results)：YHD治疗显著改善CTX诱导的免疫抑制。中剂量(100 mg/kg)使体重增长率达58.5%(APS组为17.3%)，恢复脾指数为9.41 ± 0.94(模型组1.8 ± 0.3的0.52倍)，增强刀豆蛋白A(Concanavalin A, ConA)刺激的淋巴细胞增殖率(27.03% ± 0.92% vs 模型组10.60% ± 4.78%, P < 0.01)。细胞周期分析显示YHDH组S期细胞百分比由4.13%升至13.47%。YHD亦重建细胞因子平衡：IL-1β由25.73 pg/mL升至77.10 pg/mL，IL-10由222.83 pg/mL降至20.77 pg/mL。组织病理学证实器官结构完整性恢复且无坏死。结论(Conclusion)：多味中药复方YHD对CTX诱导的免疫抑制具有显著保护效应，其机制涉及恢复免疫器官完整性、促进淋巴细胞活性及重平衡细胞因子谱。本研究为YHD的传统应用提供药理学依据，支持其作为化疗相关免疫抑制辅助治疗的潜力。

论文解读：阳和汤对环磷酰胺诱导小鼠免疫抑制的免疫调节作用研究

该研究发表于《Frontiers in Pharmacology》。目前阳和汤(Yang He Decoction, YHD)虽传统用于"温阳补血、散寒通滞"，且在乳腺癌、强直性脊柱炎及肺癌等疾病的辅助治疗中显示出免疫调节潜力，但缺乏其在全身性免疫抑制状态下免疫增强作用的系统性评价。环磷酰胺(Cyclophosphamide, CTX)是临床广泛使用的烷化类抗肿瘤药，可通过耗竭淋巴祖细胞、破坏DNA结构及抑制T/B细胞分化引起严重骨髓抑制与免疫缺陷，CTX诱导的小鼠免疫抑制模型是评价中药免疫药理作用的经典平台。鉴于此，研究人员通过建立CTX诱导的昆明(Kunming)小鼠亚急性免疫抑制模型，系统探究YHD对免疫器官形态学、淋巴细胞功能、细胞周期及血清细胞因子谱的影响，以阐明其免疫调节机制并为临床转化提供实验依据。

主要关键技术方法：

研究人员选用SPF级昆明小鼠，经腹腔注射CTX(80 mg/kg，第1、2、3、7、11天)建立免疫抑制模型，第12天起随机分为模型组、阳性对照黄芪多糖(APS, 24 mg/kg)组及YHD低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组，连续灌胃15 d，正常对照组给予生理盐水。主要检测指标包括：定期记录体重计算变化率；剖取脾脏与胸腺计算脏器指数(mg/g)；HE染色观察器官组织病理；CCK-8/WST-8法检测ConA(促T细胞)及LPS(促B细胞)诱导的脾淋巴细胞增殖；碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色流式细胞术分析细胞周期；鸡红细胞吞噬实验评估腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数；ELISA法检测血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ及IL-10浓度。数据以均值±标准差表示，采用单因素方差分析及Tukey事后检验进行统计学处理。

研究结果：

3.1 Effects of YHD on the general physiological state（YHD对一般生理状态的影响）：

CTX致小鼠毛色枯槁、活动减少、体温降低及生长停滞；YHD及APS组一般情况改善。中剂量YHD组(YHDM)第26天体重复原率达58.5%，优于APS组(17.3%)及YHDL(26.2%)、YHDH(30.4%)组，表明YHD可促进CTX处理后体质量恢复，且呈非单调剂量效应，中剂量最优。

3.2 The impact of YHD on the index of the spleen, thymus and Peyer's patch number（YHD对脾、胸腺指数及派尔集合淋巴结数的影响）：

模型组脾指数(1.8 ± 0.3)显著降低，YHDM组恢复至9.41 ± 0.94，约为模型组5.2倍，并高于健康对照组，提示免疫重建期的反弹效应(rebound effect)；胸腺指数各给药组均有升高(1.6~2.0倍)；派尔集合淋巴结(Peyer's patches)数量在YHDH组恢复至14.0 ± 0.0(模型组9.0 ± 2.1)，提示YHD可减轻CTX对肠道黏膜免疫相关淋巴组织的抑制。

3.3 Effects of YHD on the pathology of the spleen and thymus in mice with CTX-induced immunosuppression（YHD对脾和胸腺组织病理学的影响）：

HE染色示模型组脾脏白髓(white pulp, WP)与红髓(red pulp, RP)分界消失、淋巴细胞稀疏排列紊乱；胸腺皮质区淋巴细胞减少伴网状细胞增多、核固缩及皮髓质结构破坏。YHD及APS组脾脏WP/RP边界重新清晰、淋巴细胞密集增生，胸腺皮质淋巴细胞密度回升、变性减轻，证实YHD能修复CTX所致的免疫器官结构损伤。

3.4 Effects of YHD on ConA- and LPS-induced splenic lymphocyte proliferation（YHD对ConA及LPS诱导脾淋巴细胞增殖的影响）：

模型组ConA及LPS刺激后增殖率极低甚至负值。YHDM组ConA刺激增殖率达27.03% ± 0.92%，接近正常对照组(28.35% ± 3.90%)且显著优于模型组(P < 0.01)；LPS刺激下低剂量YHD(YHDL)增殖恢复最明显(12.42% ± 4.34%)。表明YHD可同时促进T淋巴细胞(Thymus-dependent lymphocyte, T cell)及B淋巴细胞(Bone marrow-derived lymphocyte, B cell)的功能恢复，且不同剂量对T/B亚群影响存在差异。

3.5 Analysis of the cell cycle（细胞周期分析）：

CTX使脾淋巴细胞阻滞于G₀/G₁期(G₀/G₁期75.77% vs 对照组57.90%)，S期细胞仅4.13%(对照组24.43%)。YHD各剂量组G₀/G₁期比例下降，S期细胞比例上升(最高YHDH组13.47%)，增殖指数(Proliferation Index, PI)回升，提示YHD可解除CTX诱导的G₀/G₁期阻滞并促进DNA合成期进入，尤以高剂量提升S期细胞最显著。

3.6 Phagocytosis of peritoneal macrophages（腹腔巨噬细胞吞噬功能）：

模型组巨噬细胞吞噬率(8.17% ± 1.72%)及吞噬指数(1.04 ± 0.07)低于对照组。YHDH组吞噬率升至11.17% ± 0.98%(P < 0.05)，各YHD组吞噬指数均有上调，说明YHD可增强固有免疫中非特异性吞噬功能。

3.7 Effects of YHD on cytokines（YHD对细胞因子的影响）：

CTX致促炎因子IL-1β(25.73 pg/mL)、IL-6(14.23 pg/mL)、IFN-γ(11.19 pg/mL)显著下调，抑炎因子IL-10异常升高(222.83 pg/mL)；TNF-α略降但无统计学差异。YHD各剂量使IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ回升接近正常水平，其中YHDH组IL-1β(77.10 pg/mL)及IFN-γ(46.67 pg/mL)略高于对照组；IL-10被显著抑制至接近正常低值(最低YHDM组20.77 pg/mL)，表明YHD通过上调Th1型/促炎细胞因子、下调过度表达的IL-10重建免疫稳态。

讨论与结论总结：

讨论部分指出YHD通过多组分协同作用逆转CTX引起的免疫器官萎缩与结构破坏、解除淋巴细胞G₀/G₁期阻滞、促进T/B细胞增殖及巨噬细胞吞噬，并双向调节细胞因子谱纠正CTX所致免疫偏离——即恢复低下的IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ并抑制异常升高的IL-10。研究观察到非单调剂量—效应关系，中剂量(100 mg/kg)在脾指数、体重恢复及ConA刺激增殖方面表现最优，符合中药复方常见的hormesis(毒物兴奋效应)或成分间协同/拮抗平衡偏移现象；个别指标超正常对照(如脾指数)属免疫重建反弹而非病理性活化，组织学未见坏死或浸润支持此点。作者亦指出本研究的局限性在于未使用荷瘤模型验证YHD是否干扰CTX抗肿瘤效应，未来需在同源移植瘤模型中进一步评估其作为化疗辅助用药对肿瘤微环境及化疗敏感性的影响，并通过分子实验验证DNA损伤应答(p53/p21/γ-H2AX)、抗氧化(Nrf2/HO-1)及PI3K/Akt存活通路参与的可能机制。

结论(Conclusion)：

阳和汤(YHD)可调节免疫器官状态、增强巨噬细胞吞噬功能、调节血清细胞因子水平并促进免疫抑制小鼠脾淋巴细胞增殖，表明YHD对接受化疗的免疫抑制患者具有治疗潜力，可作为免疫缺陷相关疾病辅助治疗药物开发的候选方剂。