Ca Ski细胞通过小型细胞外囊泡传递HPV16转录本，从而促进HPV阴性受体癌细胞的增殖

《Cell Communication and Signaling》：Small extracellular vesicle-mediated transfer of HPV16 transcripts from Ca Ski cells increases proliferation of HPV-negative recipient cancer cells

　　

摘要

背景

肿瘤产生的细胞外囊泡在癌症进展中起着关键作用，它们能将生物活性物质（核酸、脂质、蛋白质）传递给靶细胞，从而增强这些细胞的增殖、迁移和侵袭能力。细胞外囊泡也与病毒相关的致癌过程有关。宫颈癌是由于持续感染高危型人乳头瘤病毒所致，该病毒整合到细胞基因组中后，会导致病毒致癌蛋白E6/E7的持续且异常表达，进而引发癌变。本研究旨在分离出HPV感染细胞产生的细胞外囊泡，分析其中的病毒成分，确定这些病毒成分是否会影响不含HPV的受体细胞的增殖状态。

方法

通过超速离心或专用试剂盒从携带HPV16的Ca Ski细胞中分离出细胞外囊泡。随后利用NTA检测其大小，通过透射电子显微镜观察形态，并通过西方印迹法检测细胞外囊泡的标志物（CD9、CD63、CD81、ALIX、TSG101、Flotillin-1、Syntenin）。对于病毒成分（HPV16 DNA；e6/e7、e6*I、e6^e7早期转录本；E6/E7致癌蛋白），则通过PCR/RTqPCR和免疫印迹法进行分析。此外，还使用共聚焦显微镜观察荧光标记的细胞外囊泡被HPV阴性的膀胱癌T24细胞吞噬的情况。通过IncuCyte和CCK-8试验评估Ca Ski细胞外囊泡对T24细胞增殖的影响，同时通过siRNA实验验证早期转录本在细胞增殖中的作用。

结果

从Ca Ski细胞上清液中分离出了富含小细胞外囊泡的组分。在细胞外囊泡中检测到了未剪接的e6/e7转录本以及剪接后的变体e6*I /e6^e7，但未发现HPV16 DNA或E6/E7蛋白。经过24小时培养后，细胞外囊泡被T24细胞吞噬，进而促进了这些细胞的增殖，而这种生物学效应部分是由细胞外囊泡中所含的e6/e7转录本导致的。

结论

在完成对Ca Ski细胞小细胞外囊泡的全面分析（NTA、显微镜观察、PCR、西方印迹法）后，我们的研究首次证明了HPV16早期转录本可以通过细胞外囊泡传递，进而推动不含HPV的靶细胞增殖。携带HPV16 e6/e7 mRNA的细胞外囊泡可作为疾病发生前的早期生物标志物，用于预测宫颈癌前病变向癌症的发展趋势，同时通过简单的液体活检技术实现对患者的监测。