摘要
溶酶体酶α-半乳糖苷酶A（AGAL）能够降解球三糖基神经酰胺（Gb3）。虽然这种在溶酶体代谢中的酶功能已被充分研究，但其相互作用蛋白以及其他功能仍不清楚。本研究旨在寻找新的可能与AGAL相互作用的蛋白质。研究人员将AGAL与大肠杆菌中经过突变的生物素连接酶BirA（TurboID）融合在一起。通过西方印迹法和免疫荧光法确认了该融合蛋白的表达，同时通过功能实验验证了其酶活性。在三种实验条件下——AGAL野生型、AGAL错义变异体（p.N215S）以及对照细胞系——利用链霉亲和素拉取法富集了经TurboID标记的近端蛋白质，并通过质谱技术对其进行分析。随后通过基因本体论术语对所鉴定蛋白质的生物学功能及定位进行了分析。选定的候选蛋白还与AGAL进行了共免疫沉淀实验，以确认二者之间存在直接相互作用。该AGAL-TurboID融合蛋白已在AB8/13足细胞中成功表达，免疫荧光实验和酶活性测试均证实了该融合蛋白的存在及其功能性。进一步的功能分析显示，在生物过程类别中，与细胞外基质组织、多细胞生物发育以及蛋白质代谢过程相关的术语出现频率较高。其中最显著的候选蛋白主要参与细胞外基质的组织、细胞增殖与分裂、内质网应激时的未折叠蛋白反应以及蛋白质泛素化过程。共免疫沉淀实验进一步证实了AGAL与候选的半乳糖凝集素-3结合蛋白（Gal-3BP）之间存在相互作用。我们的研究结果表明，AGAL除了在溶酶体功能中的作用外，可能还参与其他代谢途径以及细胞外基质的组织结构。目前已确认的AGAL与Gal-3BP之间的相互作用，可在后续研究中进一步探究其功能。
