头颈癌中的人乳头瘤病毒基因分型：来自哥伦比亚队列的见解

《Brazilian Journal of Otorhinolaryngology》：HPV genotyping in head and neck cancer: Insights from a Colombian cohort

　　

目的：描述在哥伦比亚一家三级医院治疗的头颈部鳞状细胞癌（Head and Neck Squamous Cell Carcinoma, HNSCC）患者中人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus, HPV）感染的频率和分布。方法：研究人员开展了一项描述性横断面研究，纳入2015年至2021年间在哥伦比亚Fundación Santa Fe de Bogotá确诊为HNSCC的81例患者，作为InterCHANGE和HEADSpace研究的哥伦比亚队列的一部分。研究人员分析福尔马林固定石蜡包埋（Formalin-Fixed Paraffin-Embedded, FFPE）肿瘤样本，进行HPV DNA检测和基因分型。其中59份样本使用HPV-Direct Flow CHIP检测（Master Diagnóstica, Seville, Spain）处理，22份使用INNO-LiPA HPV Genotyping Extra检测（Fujirebio, Gothenburg, Sweden）处理。两种技术均通过聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）扩增和反向杂交鉴定高危险型和低危险型HPV基因型。所有病例均使用抗p16^INK4a（E6H4克隆）抗体进行p16免疫组织化学（Immunohistochemistry, IHC）检测，将≥70%肿瘤细胞中强核和胞质染色视为阳性。描述性统计包括绝对频率和相对频率。结果：平均年龄为66岁（±11），64.2%为男性。口咽是最常见的肿瘤部位（50.6%，n=41），其次是口腔（35.8%，n=29）和喉（13.6%，n=11）。总体而言，51.9%（n=42）的肿瘤为HPV DNA阳性。HPV感染在口咽癌中更为常见（92.7%，n=38），而在口腔（6.9%，n=2）或喉（18.2%，n=2）中较少。HPV-16是主要基因型（79.4%），其次是HPV-35、HPV-18和HPV-33。p16过表达在49.4%（n=40）的病例中观察到，主要见于口咽癌（87.8%，n=36）。在HPV DNA阳性肿瘤中，92.5%（n=37）也为p16阳性。结论：本研究表明，在该队列中，与头颈其他部位相比，口咽癌中HPV（主要为HPV-16）的患病率较高。这些结果为哥伦比亚提供了基线数据，并强调需要开展包括更多异质性人群的多中心研究，以指导未来的预防与控制策略。证据级别：4（根据2011年牛津循证医学中心）。

### 论文解读：哥伦比亚头颈癌队列中人乳头瘤病毒基因分型的临床与流行病学意义

#### 研究背景与存在问题

头颈部鳞状细胞癌（Head and Neck Squamous Cell Carcinoma, HNSCC）是全球第十大常见癌症，约占所有癌症诊断的4.5%。传统上，长期烟草和酒精使用是HNSCC的主要危险因素。然而，近年来人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus, HPV）感染，尤其是与口咽鳞状细胞癌（Oropharyngeal Squamous Cell Carcinoma, OPSCC）的关联，已成为重要的病因学因素。HPV相关的OPSCC具有独特的临床、人口学和分子特征，通常预后优于HPV非依赖性肿瘤。HPV通过其E6和E7癌蛋白分别灭活p53和视网膜母细胞瘤蛋白（Retinoblastoma protein, pRb），促进细胞转化。全球范围内，HPV感染在口咽癌中的患病率存在显著地域差异，例如美国为6.6%，中国为4.08%。在哥伦比亚，既往一项研究报道HNSCC中HPV感染频率为18.9%，但未进行p16免疫组织化学（Immunohistochemistry, IHC）检测，限制了关于病毒转录活性的结论。鉴于HPV在口咽癌中的日益重要性以及哥伦比亚人群数据的有限性，这项研究旨在描述HNSCC患者不同解剖部位的HPV感染频率和基因型分布，并评估p16表达作为病毒整合替代标志物的价值。该论文发表在《Brazilian Journal of Otorhinolaryngology》。

#### 研究人员开展的研究与结论

研究人员开展了一项分析性观察性横断面研究，纳入2015年至2021年间在哥伦比亚Fundación Santa Fe de Bogotá三级医院治疗的81例HNSCC患者，这些患者来自InterCHANGE和HEADSpace研究的哥伦比亚队列。通过分析福尔马林固定石蜡包埋（Formalin-Fixed Paraffin-Embedded, FFPE）肿瘤样本，进行HPV DNA检测和基因分型，并评估p16 IHC表达。研究得出以下结论：在哥伦比亚队列中，口咽癌中HPV感染率极高（92.68%），以HPV-16为主要基因型（79.4%）；p16过表达与HPV DNA检测具有高度一致性（92.5%）；HPV相关OPSCC更多诊断为早期（I–II期）。这些结果为哥伦比亚提供了基线数据，并强调需要开展多中心研究以指导预防与控制策略。

#### 主要关键技术与方法

研究人员使用两种商业检测方法进行HPV基因分型：59份样本采用HPV-Direct Flow CHIP检测（Master Diagnóstica, Seville, Spain），鉴定36种HPV基因型（18种高危险型和18种低危险型）；22份样本采用INNO-LiPA HPV Genotyping Extra检测（Fujirebio, Gothenburg, Sweden），鉴定32种HPV基因型。两种方法均基于聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）扩增和反向杂交原理。所有81份样本均使用抗p16^INK4a（E6H4克隆）抗体进行p16 IHC检测，阳性标准为>70%肿瘤细胞中强核和胞质染色。样本队列来源于哥伦比亚波哥大Fundación Santa Fe de Bogotá，是InterCHANGE和HEADSpace研究的一部分。

#### 研究结果

**人口学特征**：81例HNSCC患者平均年龄66岁（±11），64.2%为男性。口咽是最常见部位（50.6%），其次为口腔（35.8%）和喉（13.6%）。口咽癌患者平均年龄略低（63岁），男性占78.0%，且教育水平较高（48.8%有大学学历）。

**烟草与酒精使用**：烟草使用在各部位均常见，但在口咽癌中更频繁（63.4% vs. 口腔-喉组55.0%）。酒精消费在口咽癌中近乎普遍（97.6%），而口腔-喉组为62.5%。

**性行为**：在57例提供性行为信息（70.4%）的患者中，口咽癌患者60.9%报告有两个或更多性伴侣，口腔-喉组仅10.0%。口咽癌患者19.5%报告有口交行为。

**HPV DNA感染**：总体51.9%（42/81）的肿瘤为HPV DNA阳性，其中81.0%为单一感染，19.0%为共感染。HPV-16是主要基因型（79.4%），其次为HPV-35、HPV-18、HPV-33和HPV-31。7例为双重共感染，1例为三重共感染，常见类型为HPV-16与HPV-35组合。低危险型HPV仅在共感染中出现（HPV-44和HPV-55）。按部位分析，口咽癌中HPV DNA阳性率最高（92.7%），显著高于口腔（6.9%）和喉（18.2%）。

**p16免疫组织化学**：p16过表达见于49.4%（40/81）的肿瘤，主要集中于口咽癌（87.8%），而口腔（6.9%）和喉（18.2%）中较低。在42例HPV DNA阳性肿瘤中，92.5%（37例）为p16阳性，显示高度一致性；36例为HPV相关OPSCC，1例为喉癌。在HPV DNA阴性肿瘤中，87.8%为p16阴性。

**临床结局**：根据AJCC第8版分期，口腔癌中51.7%为I–II期，48.3%为III–IV期；口咽癌中73.2%为I–II期，24.4%为III–IV期；喉癌均I期。三年随访总死亡率为29.6%，复发率为13.6%。在口咽癌中，HPV相关OPSCC死亡率（26.8%）高于HPV非依赖性（7.3%），但90.9%的死亡发生在有吸烟史的患者中。复发在HPV相关OPSCC中占19.5%，HPV非依赖性占2.4%；其中75.0%有吸烟史。

#### 讨论总结与结论

讨论部分指出，该研究发现的口咽癌HPV高感染率（92.68%）与巴西（80%）、黎巴嫩（85%）等高流行地区相当，高于美国（68%）、丹麦（55%）、瑞典（70%），将哥伦比亚列为HPV相关口咽癌高发国家。HPV-16的绝对优势与全球系列一致（88%），而HPV-35、HPV-33等基因型的出现支持在头颈癌分子监测中纳入更广泛的HPV类型。人口学特征（男性为主、平均年龄63岁、教育水平较高）与既往描述相符，反映了全球向老年男性转移的流行病学变化。p16与HPV DNA的高一致性（92.5%）进一步验证了p16 IHC作为可靠替代标志物的价值。研究局限性包括样本量较小、单中心便利样本（主要服务私人保险患者），可能限制推广性，需多中心研究。

**研究结论**（翻译）：本描述性研究提供了哥伦比亚头颈部鳞状细胞癌中HPV感染的最新概况。观察到HPV相关口咽癌的高频率，以p16过表达和HPV-16基因型为主。该亚组的人口学和临床特征（主要影响60-70岁男性、教育水平较高）与既往HPV相关OPSCC特征一致。本队列中的患病率与巴西（80%）相似，高于美国（68%）、丹麦（55%）和瑞典（70%），与黎巴嫩（85%）的高水平相当，使哥伦比亚跻身HPV相关口咽癌高频率国家之列。这些结果为哥伦比亚人群提供了基线信息，并强调需要开展包括不同地区和医疗系统患者的多中心研究，以及对疫苗接种人群的前瞻性评估，以加强HPV相关头颈癌的流行病学监测和预防策略。