抑制TRIP13/KNTC1可阻碍DNA损伤修复，提高卵巢癌对奥拉帕利的敏感性

《The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics》：Silencing TRIP13/KNTC1 inhibits DNA damage repair and enhances Olaparib sensitivity in ovarian cancer

　　

Xingzi Guo|Jie Tang|He Li|Saiping Mao|Yan-Xiang Tang|Zhen-Zi Tang|Lianghui Gong

中国湖南省长沙市中南大学湘雅医学院附属湖南癌症医院妇科肿瘤科

摘要

卵巢癌具有较高的死亡率，且患者对奥拉帕利等聚（ADP-核糖）聚合酶抑制剂常常产生耐药性，尤其是在携带BRCA基因突变的肿瘤患者中。为探究奥拉帕利耐药的潜在机制，通过逐步药物诱导建立了奥拉帕利耐药的卵巢癌细胞系。通过生物信息学分析筛选出可能与耐药相关的基因，并在临床样本中进行验证。进一步通过基因沉默、共免疫沉淀、免疫荧光、彗星实验以及OVCAR3异种移植模型研究这些基因的生物学功能及作用机制。生物信息学分析显示，TRIP13和KNTC1在奥拉帕利耐药细胞中高表达，且与不良预后相关。RT-qPCR、Western blotting和免疫组化实验进一步证实了它们表达水平的升高。功能研究结果表明，沉默TRIP13或KNTC1都能抑制奥拉帕利耐药卵巢细胞的增殖并诱导其凋亡。从机制上讲，共免疫沉淀和免疫荧光实验表明TRIP13与KNTC1在细胞质中存在相互作用。TRIP13基因敲低会损害非同源末端连接修复功能，表现为NHEJ相关蛋白表达下降、γH2AX积累增加以及彗星尾长度延长。相反，TRIP13过表达则会促进NHEJ修复，减少奥拉帕利引起的DNA损伤，而这些效应可被NHEJ抑制剂SCR130部分逆转。在体内，TRIP13过表达会促进肿瘤生长并降低对奥拉帕利的敏感性，而KNTC1基因敲低则能逆转这些效应。总体而言，这些研究结果表明TRIP13和KNTC1共同促进NHEJ介导的DNA修复，从而导致BRCA突变型卵巢癌对奥拉帕利的耐药性。因此，针对TRIP13/KNTC1轴进行干预可能提高奥拉帕利的治疗效果，为克服PARP抑制剂耐药性提供新的策略。

章节节选

1. 引言

卵巢癌仍是全球范围内最为致命的妇科恶性肿瘤之一¹，可大致分为上皮性和非上皮性两大亚型，其中上皮性卵巢癌占所有病例的90%以上²。在上皮性卵巢癌的各亚型中，高级别浆液性癌导致的发病率和死亡率最高³。由于卵巢癌发展隐匿，往往在晚期才被诊断出来，且复发率很高，其

2.1 临床样本的收集与处理

从湖南癌症医院的8名高级别浆液性癌患者身上采集了肿瘤组织及对应的肿瘤周围组织样本。这些患者的年龄在44至66岁之间。根据国际妇产科联合会的分期标准，其中1名患者处于IIIIC期，1名处于IVA期，6名处于IVB期。在采集组织之前，7名患者尚未接受化疗，仅有1名患者接受过3个周期的紫杉醇加卡铂联合治疗

3.1 奥拉帕利耐药细胞系的建立与验证

为培育奥拉帕利耐药的卵巢癌细胞系，将亲本细胞A2780和OVCAR3持续暴露在逐渐升高的奥拉帕利浓度环境中，由此产生的耐药细胞分别被命名为A2780/Ola和OVCAR3/Ola。为验证这些细胞的耐药表型，用不同浓度的奥拉帕利（0、2.5、10、40、160、640和2560 μg/mL）处理亲本细胞和耐药细胞，然后通过MTT试验检测细胞存活率。如图1A所示，72小时后

4. 讨论

奥拉帕利等PARP抑制剂已成为高级别浆液性癌患者，尤其是那些带有BRCA突变且HR修复功能受损的患者的标准维持治疗药物²⁵。然而，在高级别浆液性癌中药物耐药性问题十分突出，因为一旦使用PARP抑制剂，癌细胞对DNA修复的依赖会形成选择压力，促使它们激活替代性的修复途径²⁶。在本研究中，我们利用奥拉帕利耐药的卵巢癌模型，旨在探索新的分子机制

CRediT作者贡献说明

Xingzi Guo：研究设计、方法学、数据整理、统计分析、资金获取、论文初稿撰写、论文审阅与编辑。Jie Tang和He Li：研究设计、数据整理、论文审阅与编辑。Saiping Mao、Yan-Xiang Tang和Zhen-Zi Tang：研究设计、方法学、论文审阅与编辑。Lianghui Gong：概念构思、资金获取、项目管理、研究设计、方法学、监督、数据整理、统计分析、论文撰写——

资金支持声明

本研究得到了湖南癌症医院高层次人才扶持计划（项目编号：20250730-1009）以及中国湖南省自然科学基金（项目编号：2026JJ81744和2026JJ81658）的支持。

利益冲突声明

作者们声明不存在任何利益冲突。

CRediT作者贡献说明

Xingzi Guo：论文初稿撰写、项目管理、资金获取、统计分析、概念构思。Jie Tang：资源协调、研究设计、数据整理。He Li：结果验证、监督、方法学研究。Saiping Mao：监督、软件使用、资源协调。Yan-Xiang Tang：结果验证、方法学研究、数据整理。Zhen-Zi Tang：结果验证、数据整理。Lianghui Gong：论文审阅与编辑、项目管理、资金获取、统计分析、概念构思。

数据可用性

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