《Diagnostics》：Mesial Root Tipping of the Maxillary Lateral Incisor to Facilitate Eruption of an Impacted Canine: A Retrospective Study
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背景/目的：在中国台湾地区，超过50%的口腔癌(oral cancer)患者就诊时已处于晚期。目前尚缺乏可靠的用于病理分期及疾病监测的非侵入性生物标志物。本研究旨在鉴定与晚期口腔癌相关的特异性生物标志物，并开发用于早期病理诊断及疾病分层、患者接受度更高的非侵入
背景/目的：在中国台湾地区，超过50%的口腔癌(oral cancer)患者就诊时已处于晚期。目前尚缺乏可靠的用于病理分期及疾病监测的非侵入性生物标志物。本研究旨在鉴定与晚期口腔癌相关的特异性生物标志物，并开发用于早期病理诊断及疾病分层、患者接受度更高的非侵入性策略。方法：共纳入116名受试者，包括早期口腔癌患者31例、晚期口腔癌患者49例及健康对照者36例。收集唾液标本进行蛋白质组学(proteomics)分析，采用酶联免疫吸附测定(ELISA, Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)及组织免疫组织化学(IHC, Immunohistochemistry)验证发现物。通过恶性表型实验（集落形成、软琼脂、迁移及侵袭实验）验证其促瘤作用。结果：结果显示，CD5L(CD5 molecule-like, also known as AIM)在组织免疫组化中无法区分早晚期，而唾液CD5L水平可非侵入性区分早期与晚期患者。功能实验表明，敲低CD5L显著减弱恶性肿瘤表型（集落形成、锚定非依赖性生长、迁移、侵袭），提示其参与肿瘤侵袭及转移潜能。结论：上述发现揭示了唾液CD5L在口腔癌进展中的病理作用，支持其作为口腔癌疾病分层的非侵入性生物标志物潜力。
论文解读：唾液CD5L作为口腔鳞状细胞癌晚期分期的非侵入性生物标志物研究
研究背景与立项依据
根据2018年中国台湾癌症登记及2020年死因统计，中国台湾每年新增口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma, OSCC)确诊逾8000例，死亡超3000例。OSCC早期至晚期患者的5年无病生存率下降约40%，尽管政府提供高危人群免费口腔检查，仍有超50%患者首诊即为晚期(III/IV期)。目前临床确诊依赖视诊、触诊及侵入性组织活检(biopsy)后的组织病理学评估，许多患者因恐惧拒绝活检导致延误诊断。体液生物分子尤其是唾液，因采集无创、患者依从性高，含DNA、RNA、免疫球蛋白及细胞因子等丰富成分，被视为极具潜力的筛查介质。然而，目前尚缺乏可靠的非侵入性生物标志物用于OSCC病理分期（早期TNM 0–II期 vs 晚期III–IV期）区分。基于此，研究人员开展本研究，旨在利用唾液蛋白质组学筛选并验证能区分晚期OSCC的特异性生物标志物CD5L，并探讨其在肿瘤恶性表型中的作用。该论文发表于《Diagnostics》。
主要关键技术方法概述
研究人员采用横断面研究设计，便利抽样招募受试者分为三组：健康对照(n=36)、早期OSCC(n=31, TNM 0–II期)、晚期OSCC(n=49, TNM III–IV期)，术前行唾液采集，术中取肿瘤组织。初筛各取5例进行唾液蛋白质组学(LC–MS/MS)分析筛选差异表达蛋白，锁定候选物后以大样本唾液行酶联免疫吸附测定(ELISA)定量，肿瘤组织行免疫组化(IHC)定量(ImageJ分析)。体外选用GNM(牙龈癌颈转移细胞系)经槟榔碱(arecoline)处理及siRNA介导CD5L敲低，分别通过蛋白质印迹(Western Blot)验证表达、集落形成(colony formation)、软琼脂(soft agar, 锚定非依赖性生长)、划痕愈合(wound healing/migration)及Transwell侵袭(invasion)实验评估恶性表型改变。统计学采用Welch's ANOVA及Games–Howell事后检验、ROC曲线分析。
研究结果
3.1. Subsection Characteristics of Participants
共纳入116人，OSCC组男性为主，平均年龄高于健康对照(p<0.05)；OSCC组吸烟、饮酒、嚼食槟榔率显著高于健康对照(p<0.001)；肿瘤多位于颊黏膜及牙龈，早晚期组癌症状态无显著差异(p=0.513)。说明样本符合中国台湾OSCC流行病学特征。
3.2. Proteomics Analysis Showed CD5L Was the Candidate Biomarker of Late-Stage OSCC
蛋白质组学初筛获得92个OSCC中显著上调(>3倍,p<0.05)蛋白，进一步过滤出在健康及早期组低表达、晚期组高表达的4个候选蛋白，其中CD5L在晚期唾液ELISA中升高最显著。大样本ELISA显示：晚期组唾液CD5L均值345.96±303.54 pg/mL，早期组181.44±124.27 pg/mL，健康组173.94±91.82 pg/mL；晚期vs健康(p=0.02)及晚期vs早期(p<0.001)差异显著，健康与早期无差异(p=0.48)。ROC曲线早期vs晚期AUC=0.647(95%CI:0.515–0.778,p=0.029)。IHC显示OSCC组织CD5L表达高于正常组织，但早期与晚期组织间IHC积分光密度及阳性面积比无统计学差异(p=0.42, p=0.27)。提示唾液CD5L而非组织IHC可非侵入性区分早晚期OSCC。
3.3. CD5L Expression Was Elevated in Oral Squamous Cell Carcinoma Cell Lines and Was Upregulated by Arecoline
Western Blot显示OSCC细胞系(GNM、HSC-3、SAS)CD5L表达高于非癌变人牙龈上皮细胞(SG)，GNM最高。50 μg/mL槟榔碱处理GNM细胞3天呈CD5L上调趋势，提示嚼食槟榔可能通过上调CD5L参与OSCC进展。
3.4. RNAi Knockdown of CD5L Reduces the Malignant Phenotype of GNM Cells
siRNA敲低CD5L后经功能实验验证：集落形成能力(siRNA-3组)、迁移率、软琼脂锚定非依赖性生长及Matrigel侵袭能力均较对照组显著下降(p<0.05或p<0.0001)；群体倍增时间无显著影响。证实CD5L促进OSCC细胞恶性表型(锚定非依赖性增殖、迁移及侵袭)。
讨论与结论翻译
讨论指出，唾液CD5L(亦称AIM，属清除受体半胱氨酸丰富SRCR超家族)在晚期OSCC唾液中显著升高且可区分分期，IHC则否；未特意排除慢性病人群仍具判别力，提示其临床适用性。细胞实验证实CD5L促OSCC恶性表型，槟榔碱可上调其表达，或为槟榔相关致癌机制之一。局限含IHC样本量不等、未做槟榔碱剂量反应及正常牙龈对照比较。未来需明确下游通路(如NF-κB, STAT3, PI3K/AKT)。
结论(Conclusions)：临床病理分期需侵入性活检及组织学评估，本研究表明唾液CD5L可作为评估OSCC疾病进展及生物学侵袭性的非侵入性辅助手段，虽临床应用前需进一步验证。该无创策略有望促进早期发现与及时干预，提高患者筛查参与度。
