RET融合伴侣决定未分化梭形细胞肉瘤中RET的致癌潜能

《Cancer Biology & Therapy》：RET fusion partners dictate oncogenic potential in undifferentiated spindle cell sarcomas

　　

背景：伴RET重排的梭形细胞肿瘤临床表现从良性到高度恶性不等，其异质性疑与不同的融合伴侣基因有关，明确融合伴侣对致癌潜能的影响对精准治疗至关重要。方法：研究人员报告一例携带MYH10::RET融合的梭形细胞肿瘤病例，该病例最初对抗RET治疗有反应但因获得NTRK1融合而复发；建立稳定表达MYH10::RET和CCDC6::RET的等基因细胞系，进行细胞增殖、迁移、侵袭及激酶活性检测，并通过靶向DNA/RNA二代测序（NGS）和荧光原位杂交（FISH）行基因组分析。结果：MYH10::RET表达细胞较CCDC6::RET表达细胞增殖、迁移和侵袭能力显著增强，MYH10::RET激酶活性约为CCDC6::RET的3倍；患者通过序贯靶向治疗（包括第三代RET与NTRK抑制剂联合）实现疾病管控。结论：不同RET融合伴侣通过差异性的激酶活性显著影响RET重排梭形细胞肿瘤的临床异质性，持续基因组监测对识别耐药机制及指导精准治疗至关重要，未来应进一步探究融合伴侣对肿瘤行为及治疗反应的影响。

论文解读——《Cancer Biology & Therapy》刊载研究

研究背景与立项依据

软组织肿瘤中受体酪氨酸激酶（Receptor Tyrosine Kinase, RTK）如RET、NTRK1/2/3、ROS1、ALK等的激活多由染色体易位形成融合基因驱动。RET融合在甲状腺乳头状癌和非小细胞肺癌（NSCLC）中已有明确致癌作用，但在软组织梭形细胞肿瘤中相对罕见。现有证据表明，RET重排梭形细胞肿瘤形态学与NTRK重排肿瘤重叠，且临床行为差异极大——含CCDC6::RET或NCOA4::RET者多呈惰性（如类脂肪纤维瘤病样神经肿瘤，Lipofibromatosis-like Neural Tumor, LPF-NT），而MYH10::RET则见于高级别、伴转移的侵袭性肉瘤。造成这种临床异质性的生物学机制不明，融合伴侣是否通过影响RET激酶活性调控肿瘤恶性程度尚无实验验证。此外，RET靶向抑制剂（如Selpercatinib、Pralsetinib）已在临床应用，但继发耐药机制（包括获得性旁路激酶融合）在肉瘤中罕有报道。为此，研究人员开展本研究以明确RET融合伴侣对致癌潜能及治疗反应的影响，并追踪患者全程分子演变以指导序贯精准治疗。

主要关键技术方法

研究人员纳入一例经病理及分子确诊的未分化梭形细胞肉瘤伴MYH10::RET融合患者的原发灶及转移灶活检标本；采用福尔马林固定石蜡包埋（Formalin-Fixed Paraffin-Embedded, FFPE）组织进行靶向DNA NGS（638个癌症相关基因）、靶向RNA NGS（118个实体瘤相关融合基因）及RET/NTRK1双色分离探针荧光原位杂交（Fluorescence In Situ Hybridization, FISH）；构建慢病毒载体将MYH10::RET与CCDC6::RET分别导入NIH/3T3细胞建立等基因稳转细胞系；通过CCK?8法检测细胞增殖、划痕（Wound Healing）实验检测迁移、Transwell侵袭实验检测侵袭能力；采用Western Blot及免疫共沉淀（Co?Immunoprecipitation, Co?IP）检测磷酸化RET（p?RET Tyr⁹⁰⁵）及下游ERK1/2（p?MAPK/MAPK），并使用ADP?Glo激酶活性试剂盒测定体外激酶催化效率（K_cat/K_M）；对患者治疗全程行动态分子监测以识别耐药相关新发融合及激酶域突变。

研究结果

3.1. Genomic profile of a RET?rearranged spindle cell tumor（RET重排梭形细胞肿瘤的基因组学特征）

研究人员对37岁男性患者左膝原发肿瘤行HE染色示束状排列梭形细胞伴血管外皮细胞瘤样血管及坏死区，免疫组化（Immunohistochemistry, IHC）CD34、S100、pan?TRK均阴性。DNA NGS检出CDKN2A/B纯合缺失、1p/16/20q/21获得及无开放阅读框的FGF20::RET重排；FISH证实RET断裂信号；RNA NGS最终鉴定出功能性MYH10::RET融合（MYH10外显子1?32与RET外显子12?21融合），融合蛋白保留MYH10肌球蛋白头部（介导二聚化自磷酸化）及完整RET酪氨酸激酶域（Tyrosine Kinase domain, TK）。术后10个月出现肺转移，活检证实相同MYH10::RET融合。患者接受Pralsetinib治疗后达近完全缓解，后因药物相关重症肺部感染停药控制感染后改用Selpercatinib病情再获稳定。约2年后疾病进展伴心包积液，再次活检发现同一肿瘤细胞共存MYH10::RET与新发TPM3::NTRK1融合（FISH连续探针验证），IHC转为CD34及pan?TRK阳性。予Selpercatinib联合Entrectinib后部分缓解，但再进展后发现RET p.G810S及NTRK1 p.G595R激酶域耐药突变，换用Selpercatinib联合Repotrectinib（新一代广谱ROS1/TRK/ALK抑制剂可克服溶剂前沿及门控突变）后肿瘤明显缩小并长期维持稳定。结论：MYH10::RET驱动的肿瘤可在RET抑制剂选择压力下获得旁路NTRK1融合及继发激酶域突变，需动态基因组监测并及时切换相应靶向药物。

3.2. Functional evaluation of MYH10::RET and CCDC6::RET（MYH10::RET与CCDC6::RET的功能学评价）

研究人员将MYH10::RET与CCDC6::RET慢病毒感染NIH/3T3细胞，免疫荧光确认融合蛋白定位于胞质。CCK?8示MYH10::RET组在24/48/72 h增殖率显著高于CCDC6::RET组及空载体对照组；划痕实验示MYH10::RET组24 h及48 h迁移率显著高于CCDC6::RET组；Transwell侵袭实验示MYH10::RET组穿膜细胞数显著多于CCDC6::RET组。两株细胞均对Selpercatinib、Pralsetinib及Cabozantinib敏感，MYH10::RET细胞IC₅₀略低于CCDC6::RET细胞。Western Blot及Co?IP显示MYH10::RET自身磷酸化（p?RET Tyr⁹⁰⁵）及下游p?MAPK水平均显著高于CCDC6::RET；体外激酶活性测定显示MYH10::RET催化效率（K_cat/K_M）约为CCDC6::RET的3倍。结论：不同RET融合伴侣通过赋予差异的构成性激酶活性，直接导致细胞增殖、迁移及侵袭能力的差别，进而决定肿瘤的生物学行为与临床侵袭性。

讨论与结论总结

讨论指出，本研究首次在功能层面证实RET融合伴侣（MYH10 vs CCDC6）可通过影响融合蛋白激酶活性导致梭形细胞肉瘤临床异质性——MYH10含强二聚化结构域（肌球蛋白头部）致RET持续高活化，对应高侵袭表型；CCDC6为弱二聚化伴侣，对应惰性表型。病例中还观察到RET抑制剂选择压力下获得性TPM3::NTRK1融合及双激酶域耐药突变（RET G810S、NTRK1 G595R），强调连续分子谱检测价值及针对多重耐药突变选用新一代抑制剂（如Repotrectinib）的重要性。研究亦提及Pralsetinib相关肺部严重感染需与肿瘤进展鉴别，微生物NGS有助于鉴别诊断。局限性在于仅在NIH/3T3模型中比较两种融合，未涵盖更多融合伴侣及原代肿瘤细胞背景。

结论（翻译）：综上，研究人员表征了一例罕见的伴MYH10::RET融合的转移性梭形细胞肉瘤，并通过等基因细胞模型证实MYH10::RET表达细胞具高侵袭性行为。结果表明，RET的不同融合伴侣通过差异激酶活性贡献于此类肿瘤常见的临床异质性。此外本研究强调了持续基因组监测对识别耐药机制及选用适宜抑制剂实施精准治疗的关键意义。