埃普斯坦-巴尔病毒阳性炎性滤泡树突状细胞肉瘤中周期蛋白D1的扩增与过表达：一项靶向下一代测序研究

《Modern Pathology》：Amplification and Overexpression of Cyclin D1 in Epstein–Barr Virus-Positive Inflammatory Follicular Dendritic Cell Sarcoma: A Targeted Next-Generation Sequencing Study

　　

陈英仁|蒋伯民|林珍|王树贤|李建杰|李欣妮|马玉春|李志玲|黄万廷|赵万如|王仁清|陈博君|L. Jeffrey Medeiros|张功超

台湾台南市国立成功大学医学院国家成功大学医院病理学系

摘要

滤泡性树突状细胞肉瘤（FDCS）可分为传统型与炎性型（IFDCS）。IFDCS通常与Epstein–Barr病毒（EBV）感染相关，且临床进展较缓。尽管认为EBV参与了IFDCS的发病机制，但其具体作用机制尚未完全明确。最近的下一代测序研究发现了涉及主要组织相容性复合体、表观遗传调控通路以及与免疫反应相关的信号通路的重复性体细胞变异。在本研究中，我们对31例IFDCS病例的523个与癌症相关的基因进行了靶向DNA测序。这些病例包括13名男性和18名女性，平均年龄为62.6岁（范围：36–84岁）。肿瘤多发生于脾脏（n=20）、肝脏（n=8）、结肠（n=2）和胰腺（n=1），平均肿瘤大小为5.8厘米（范围：1.4–11.7厘米）。在71%的病例中发现了基因变异，其中CCND1扩增（3-5个拷贝）最为常见（45.5%），其次是EZH2突变（18.2%）、MYC扩增（3-4个拷贝，13.6%）以及ATM突变（9.1%）。通路分析显示，细胞周期进展是IFDCS中主要的激活信号通路。RNA 原位杂交和双重免疫组化染色证实了FDCs中cyclin D1和MYC的过度表达。从临床上看，无论TSO500检测结果为阳性（88.9%）还是阴性（71.4%），都经常出现cyclin D1的过度表达，且这一现象与肿瘤行为无关。TSO500阳性肿瘤与阴性肿瘤之间不存在显著的临床病理差异。值得注意的是，脾脏起源的肿瘤与女性患者占比更高（p=0.011）以及肿瘤体积更大（p=0.048）有关。此外，84.6%的病例中肿瘤细胞呈现II型EBV潜伏模式（LMP1+/EBNA2-），且LMP1的表达与肿瘤体积较大相关（p=0.021）。综上所述，这些发现表明EBV可能激活cyclin D1通路，且EBV–LMP1–CCND1信号通路可能参与了IFDCS的发病机制。

引言

滤泡性树突状细胞肉瘤（FDCS）是一种罕见的具有滤泡性树突状细胞分化特征的肿瘤，可分为传统型与炎性FDCS型（IFDCS）。¹传统型FDCS属于中分化肉瘤，约有四分之一的病例会出现复发、转移或死亡。该肿瘤多发生于中年人，且更常出现在淋巴结外的部位。^2,3从形态学上看，这类肿瘤由呈束状或合胞体状排列的滤泡性树突状细胞组成，其间散布着炎症细胞，且FDC标志物表达强烈，很少或不存在与Epstein–Barr病毒（EBV）的关联。³

IFDCS较为罕见，目前英文文献中仅报道了约130例。这类肿瘤的临床进展极慢，复发、转移或死亡的比率极低，多发生于肝脏和脾脏，极少累及肝脾以外的部位。⁴从形态学上看，这类肿瘤的特点是在富含淋巴浆细胞性浸润的炎症背景下存在少量肿瘤性FDCs，FDC标志物的表达强度和比例各异，且始终与EBV相关，含有克隆性的EBV基因组。^2,5有研究描述过表达肌成纤维细胞标志物的EBV阳性炎性假性肿瘤。⁶尽管这些病变与IFDCS在形态学上相似，但它们的免疫表型不同，表现为平滑肌肌动蛋白阳性而FDC标志物阴性。现有证据表明，这些病变可能属于同一疾病谱系。⁵两种类型的FDCS治疗方案主要为手术切除；不过传统型FDCS患者可能需要辅助放疗或化疗来控制病情。³而IFDCS患者则几乎只接受术后随访。有研究指出，部分传统型FDCS病例会出现副肿瘤性天疱疮：⁷而在IFDCS中则极为少见。⁸传统型与炎性型FDCS的差异总结见表1。⁴

由于IFDCS中始终存在EBV感染和克隆性EBV基因组，因此EBV被认为在其发病机制中起关键作用。EBV编码的蛋白——潜伏膜蛋白-1（LMP1）和Epstein-Barr核抗原-2（EBNA2）的表达会因靶细胞的类型、分化程度及激活状态而有所不同，由此将EBV感染的细胞分为三种潜伏模式。其中包括I型潜伏程序（LMP1-/EBNA2-），见于伯基特淋巴瘤；II型默认程序（LMP1+/EBNA2?），见于霍奇金淋巴瘤、鼻咽癌和NK/T细胞淋巴瘤；以及III型生长程序（LMP1+/EBNA2+），是一些移植后淋巴增生性疾病的特点。⁹然而，EBV在IFDCS中的作用机制仍不明确，其潜伏程序也尚未被充分阐明。

在一项针对组织细胞和树突状细胞肿瘤的大规模系列研究中，通过Sanger测序和PNAcqPCR技术，发现40%（2/5）的IFDCS病例存在BRAF^V600E突变，这表明这类肿瘤可能适合接受靶向治疗。¹⁰另一项研究试图通过下一代测序技术检测BRAF^V600E突变、其他激酶变异以及新的基因融合情况，但在两例IFDCS中未发现任何致病性基因变异或BRAF突变。¹¹不过，这两项研究分别仅纳入了5例和2例病例。^10,11需要更大规模的系列研究以及全面的分子检测，才能明确IFDCS的分子发病机制及潜在的治疗策略。最近一项针对34例EBV阳性IFDCS的大规模系列研究通过全面嘅下一代测序，发现了影响主要组织相容性复合体-I/II、涉及表观遗传调控的关键信号通路、NFκB、RTK/RAS/PI3K和Hippo通路以及与病毒感染、免疫反应和多种免疫检查点基因相关的通路异常活化现象。¹²本文还发现了多种可能促进该肿瘤发生发展的基因变异。

在此，我们通过靶向DNA测序分析了IFDCS中的基因变异，以探究其分子发病机制。

章节节选

炎性滤泡性树突状细胞肉瘤（IFDCS）病例

这些被诊断为IFDCS的病例来自其中一位作者（K-C C）的病历档案以及国家成功大学医院2011年1月1日至2024年9月1日期间的档案。临床数据是通过回顾性病历审查收集的，包括性别、年龄、全身症状、副肿瘤性天疱疮、肿瘤位置（肝脏、脾脏或其他部位）、复发情况、转移情况以及总生存期（以月为单位）。所有可用的苏木精-伊红染色切片

临床特征

如表2所示，这些病例包括13名男性和18名女性，平均年龄为62.6岁（范围：36-84岁）。肿瘤多发生于脾脏（n=20，64.5%）、肝脏（n=8，25.8%）、结肠（n=2，6.5%）和胰腺（n=1，3.2%）。大多数患者的肿瘤是偶然发现的，没有全身症状（n=18，58.1%），但也有一些患者出现了腹痛（n=4，12.9%）、乏力（n=3，9.7%）或体重下降（n=2，6.5%）。患有结肠肿瘤的两名患者均出现了结肠出血症状

讨论

IFDCS是一种罕见的肿瘤，好发于肝脏和脾脏，肿瘤细胞数量相对较少，背景为炎症环境。其与EBV感染的恒定关联使其发病机制更为复杂。Li等人最近的整合基因组学和转录组学分析揭示了EBV+ IFDCS的特征性分子特征，强调了免疫通路的激活以及免疫检查点基因的上调，并提出了相关潜在作用机制

利益冲突声明

所有作者均声明不存在利益冲突。

致谢

我们感谢台湾台南市国家卫生研究院国家癌症研究所的苏永业医学博士、哲学博士，他在全外显子组测序方面做出了杰出贡献。同时也要感谢国家成功大学医院临床医学研究中心的人类生物样本库所提供的支持。此外，作者们还要感谢以下医生提供的临床信息：台湾台南市嘉美医院的朱长耀医生、吴佳琪医生