瘤内纤维化（Intratumoral Fibrosis, ITF）是肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma, HCC）肝切除术后患者潜在的预后生物标志物

《Journal of Hepatocellular Carcinoma》：Intratumoral Fibrosis is a Potential Biomarker in Patients with Hepatocellular Carcinoma Undergoing Liver Resection

　　

背景（Background）：已有研究表明瘤内纤维化（intratumoral fibrosis, ITF）可影响多种伴纤维化的实体肿瘤预后。因此本研究旨在验证ITF作为接受肝切除术（liver resection, LRE）的肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）患者潜在预后生物标志物的价值。 方法（Methods）：研究纳入367例经病理确诊并接受LRE的成人HCC患者。采用半定量天狼星红染色（Sirius red staining）评分（0–3分）将患者分为高水平ITF组（评分≥2）和低水平ITF组（评分<2）。对切除标本行CD34免疫组化（immunohistochemistry, IHC）染色以测定微血管密度（microvascular density, MVD）并探讨ITF与肿瘤血管生成的关系。采用反向逐步选择Cox比例风险回归模型（Cox proportional hazards regression with backward stepwise selection）筛选肝细胞癌早期复发的独立预测因子。为减少混杂因素影响，对高、低ITF组患者进行倾向评分匹配（propensity score matching, PSM）。采用Kaplan–Meier法评估并比较两组无病生存期（disease-free survival, DFS）和总生存期（overall survival, OS）。 结果（Results）：患者被分为高ITF组和低ITF组。反向逐步Cox回归分析显示肝硬化（P<0.001）、血清单核细胞计数（P<0.001）、甲胎蛋白（alpha-fetoprotein, AFP）>200 ng/mL（P<0.001）、显著瘤内坏死（P<0.001）、存在瘤内动脉（P<0.001）、结节套结节（nodule-in-nodule）结构（P<0.001）及高ITF（P<0.001）均与HCC早期复发显著相关。高ITF组DFS和OS均显著短于低ITF组（PSM前后均为P<0.05）。此外，与低ITF HCC相比，高ITF HCC更常伴随较高MVD计数（54.0，IQR：43.0–67.5 vs. 45.0，IQR：30.0–58.0，P<0.001）。 结论（Conclusion）：ITF有望作为接受LRE的HCC患者早期复发及预后的预后生物标志物，可用于制定HCC个体化治疗策略。

《Intratumoral Fibrosis is a Potential Biomarker in Patients with Hepatocellular Carcinoma Undergoing Liver Resection》论文解读

一、研究背景与意义

肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）是全球癌症相关死亡第六大原因，其中HCC占原发性肝癌80%以上。肝切除术（liver resection, LRE）是HCC主要的治愈性手段，但患者异质性大，术后5年复发率高达50%–70%，其中61%–83%为术后2年内发生的早期复发。目前巴塞罗那临床肝癌（Barcelona Clinic Liver Cancer, BCLC）分期系统等主要依据肿瘤大小、数目及血管侵犯进行危险分层，难以反映肿瘤微环境（tumor microenvironment, TME）的生物学差异。瘤内纤维化（intratumoral fibrosis, ITF）系由肿瘤相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts, CAFs）介导、通过TGF-β/SMAD信号通路促进胶原交联及细胞外基质（extracellular matrix, ECM）硬化形成的病理改变，已在肾细胞癌、乳腺癌等实体瘤中被证实影响预后，并可促进肿瘤血管生成、免疫抑制及侵袭。然而ITF在HCC肝切除人群中的预后价值尚不明确。该研究旨在验证ITF是否为HCC肝切除术后早期复发及生存的独立预后生物标志物，并探讨其与瘤内血管化的关系，为术后危险分层提供依据。论文发表于Journal of Hepatocellular Carcinoma。

二、主要关键技术方法

研究人员回顾性收集中南大学湘雅二医院2013年10月至2017年3月接受LRE且符合纳入标准的367例HCC患者标本及临床资料。ITF采用天狼星红（Sirius red）染色半定量评分（0=无，1=轻度，2=中度，3=重度），≥2分为高ITF组，<2分为低ITF组。CD34免疫组化染色评估微血管密度（microvascular density, MVD）。分类变量与连续变量分别采用χ²/Fisher确切检验及t检验/Mann–Whitney U检验。采用多因素Cox比例风险回归（反向逐步选择，AIC准则）筛选早期复发（术后2年内新发病灶）独立预测因子。为控制组间基线偏倚，以存在组间差异的变量行1:1倾向评分匹配（propensity score matching, PSM，最近邻算法，卡钳值0.2倍logit PS标准差）。DFS（诊断至复发或截尾）与OS（诊断至死亡或末次随访）采用Kaplan–Meier法及Log rank检验比较，时间依赖性ROC曲线评估预测效能。

三、研究结果

Baseline Patient Characteristics（基线患者特征）

研究最终纳入367例患者（男319例，女48例），HBV感染率74.9%，BCLC A期占91.3%；低ITF组256例（69.8%），高ITF组111例（30.2%）。PSM后获得106对患者，各协变量标准化均数差（standardized mean difference, SMD）<0.25且P>0.05，基线达到平衡。

CT Imaging Features and Histological Features（CT影像特征与组织学特征）

两名放射科医师及两名肝脏病理医师对CT影像特征和组织学评估的判读一致性为中等至极好（Kappa值0.70–0.93），验证了ITF分组及影像特征判读的可靠性。

Potential Predictive Factors for Early HCC Recurrence（HCC早期复发的潜在预测因子）

全队列2年内早期复发率为54.0%（198/367）。单因素Cox筛选出18个有意义变量，多因素反向逐步Cox回归最终确定7个早期复发独立预测因子：肝硬化（HR=1.93, 95% CI: 1.43–2.62, P<0.001）、血清单核细胞计数（HR=4.92, 95% CI: 2.03–11.91, P<0.001）、AFP>200 ng/mL（HR=1.62, 95% CI: 1.22–2.16, P<0.001）、显著瘤内坏死（HR=3.18, 95% CI: 1.87–5.42, P<0.001）、瘤内动脉存在（HR=1.80, 95% CI: 1.33–2.44, P<0.001）、结节套结节结构（HR=2.39, 95% CI: 1.14–4.99, P=0.021）及高ITF（HR=2.73, 95% CI: 2.03–3.68, P<0.001）。

Combining ITF and Other Markers to Predict Early HCC Recurrence（联合ITF与其他指标预测早期复发）

单独指标AUC分别为：ITF 0.620（95% CI: 0.572–0.662）、显著瘤内坏死0.617、瘤内动脉0.615、肝硬化0.575、血清单核细胞计数0.571、AFP 0.567、结节套结节结构0.511。ITF联合临床及影像特征的整合模型AUC达0.782（95% CI: 0.732–0.827），显著高于任一单独预测因子（均P<0.001）。

Impact of Low and High ITF on DFS and OS（低与高ITF对DFS和OS的影响）

PSM前高ITF组中位DFS为9.60个月（95% CI: 7.92–14.63），低ITF组未达（not reached, NR；95% CI: 19.63–NR），P<0.001；PSM后高ITF组中位DFS 9.96个月（95% CI: 8.25–15.62），低ITF组NR（95% CI: 17.72–NR），P<0.001。PSM前高ITF组中位OS为29.20个月（95% CI: 20.80–41.00），低ITF组NR（95% CI: 81.80–NR），P<0.001；PSM后高ITF组中位OS 29.20个月（95% CI: 21.90–41.00），低ITF组NR（95% CI: 28.90–NR），P=0.023。表明无论匹配前后，高ITF均预示更差的DFS与OS。

Association Between ITF and Intratumoral Vascularization（ITF与瘤内血管化的关联）

高ITF组MVD中位数显著高于低ITF组（54.0，IQR: 43.0–67.5 vs. 45.0，IQR: 30.0–58.0，P<0.001），提示高ITF HCC伴随更活跃的肿瘤新生血管生成。

四、讨论与结论总结

研究人员讨论指出，ITF在早期可具抑癌作用，但在进展期HCC中CAFs激活致ECM硬化，通过WNT/β-catenin及TGF-β通路促进免疫屏障形成、YAP/TAZ信号激活及整合素介导的侵袭。本研究发现高ITF与高MVD共存，纤维化微环境通过稳定HIF-1α及上调VEGFA促进异常血管生成，后者因高通透性及胶原纤维排列助肿瘤细胞入血播散，从而导致早期复发及不良生存。将ITF纳入传统临床-影像参数可提高复发预测准确性（AUC由单项最高~0.62提升至0.782），提示其可作为反映间质侵袭性的量化指标补充现有分期系统，指导高危患者加强术后监测或考虑辅助治疗。研究局限性包括回顾性单中心设计、样本量有限及未深入解析CAFs异质性与具体信号轴，需在多中心前瞻性队列中进一步验证。

结论（Conclusion）翻译：

瘤内纤维化（ITF）有望作为接受肝切除术的肝细胞癌（HCC）患者早期复发及预后的预后生物标志物，具有在临床实践中辅助制定HCC个体化治疗策略的实用价值。